Тт механизм трансформации: Механизм трансформации дивана, тт

Содержание

Кит-14 Прямой диван (ТТ) в Ульяновске со склада и под заказ, качественно!

Главная
Продукция
Прямые диваны
Кит-14 Прямой диван (ТТ)

Подробнее

EAC

Сертифицировано в соответствии с современными стандартами и требованиями технических регламентов безопасности мебельной продукции EAC

Система

Системный подход — залог стабильного развития мастерства и производственного роста.

Нужна консультация?

Наши специалисты ответят на любой интересующий вопрос

Задать вопрос

Описание
Характеристики
Документы

Описание

Компактность, стильность, функциональность — три успешных составляющих Прямого Дивана КИТ-14 с механизмом трансформации ТТ.

Возможные размеры исполнения дивана ЛЕО КИТ-14 ТТ

Модель	Спальное место	Габариты
ТТ 1.0	1100х1950	1600х1050х950
ТТ 1.1	1200х1950	1700х1050х950
ТТ 1.2	1300х1950	1800х1050х950
ТТ 1.3	1400х1950	1900х1050х950
ТТ 1.4	1500х1950	2000х1050х950
ТТ 1. 5	1600х1950	2100х1050х950
ТТ 1.6	1700х1950	2200х1050х950

Характеристики

Габариты, мм	2200 х 1050 х 950
Спальное место, мм	1700 х 1950
Трансформация (расклад)	ТТ
Система хранения	Ящики для белья отсутствуют

Документы

kit-14-tt

184. 5 Кб

Заказать звонок

Написать сообщение

Оставить отзыв

Ближайший офис

Диваны в классическом стиле для гостинной или спальни. Возможно изготовление по индивидуальным размерам. Купи Диван!

Каталог товаров

Уточнить раздел

Угловые диваны 33
Прямые диваны 37
Модульные диваны 23
Диван-кровати 42
Мини диваны 17
Книжка и Еврокнижка 14
Дельфин 42
Аккордеон 3
Пантограф или Тик-Так 13
Классические диваны 41
Современные диваны 52
Кожаные диваны 11

Фильтр по параметрам

Розничная цена

Наши предложения

Хит продаж
Распродажа
Рекомендуем

Производитель

Вияна
Гармония уюта

Магнат
Матрица

Кол-во спальных мест

Все

Все
1
1,5
2
3

Ящик для белья

Есть в комплекте
Приобретается отдельно

Механизм трансформации

Аккордеон
Вперед выкатной
Дельфин
Еврокнижка
Пантограф

Показать
Сбросить

Распродажа

Хит продаж

Быстрый просмотр

Диван Вияна 177 ТТ

77 500 ₽

В корзину

Подробнее

Купить в 1 кликСравнение

В избранноеПод заказ

Трансформация Saccharomyces cerevisiae и других грибов

1. Hinnen A, Hicks JB, Fink GR. Трансформация дрожжей. Proc Natl Acad Sci USA. 1978; 75: 1929–1933. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

2. Ито Х., Фукуда Ю., Мурата К., Кимура А. Трансформация интактных дрожжевых клеток, обработанных катионами щелочных металлов. J Бактериол. 1983; 153: 163–168. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

3. Хашимото Х., Морикава Х., Ямада К., Кимура А. Новый метод трансформации интактных дрожжевых клеток путем электроинъекции плазмидной ДНК. Приложение Microbiol Biotechnol. 1985;21:336–339. [Google Scholar]

4. Armaleo D, Ye GN, Klein TM, Shark KB, Sanford JC, Johnston SA. Биолистическая ядерная трансформация Saccharomyces cerevisiae и других грибов. Карр Жене. 1990; 17:97–103. [PubMed] [Google Scholar]

5. Constanzo MC, Fox TD. Трансформация дрожжей при перемешивании со стеклянными шариками. Генетика. 1988; 120: 667–670. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

6. Beggs JD. Трансформация дрожжей репликирующей гибридной плазмидой. Природа. 1978;275:104–109. [PubMed] [Google Scholar]

7. Burgers PM, Percival KJ. Трансформация сферопластов дрожжей без слияния клеток. Анальная биохимия. 1987; 163: 391–397. [PubMed] [Google Scholar]

8. Schiestl RH, Gietz RD. Высокоэффективная трансформация интактных дрожжевых клеток с использованием одноцепочечных нуклеиновых кислот в качестве носителя. Карр Жене. 1989; 16: 339–346. [PubMed] [Google Scholar]

9. Gietz D, St. Jean A, Woods RA, Schiestl RH. Усовершенствованный метод высокоэффективной трансформации интактных клеток дрожжей. Нуклеиновые Кислоты Res. 1992;20:1425. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

10. Gietz RD, Schiestl RH, Willems AR, Woods RA. Исследования по трансформации интактных дрожжевых клеток по методике LiAc/SS-ДНК/ПЭГ. Дрожжи. 1995; 11: 355–360. [PubMed] [Google Scholar]

11. Gietz RD, Woods RA. Трансформация дрожжей методом ацетата лития/одноцепочечной ДНК-носителя/полиэтиленгликоля. Методы Энзимол. 2002; 350:87–96. [PubMed] [Google Scholar]

12. Gietz RD, Schiestl RH. Замороженные компетентные дрожжевые клетки, которые можно с высокой эффективностью трансформировать с использованием метода ДНК-носителя LiAc/SS/ПЭГ. Нат Проток. 2007; 2:1–4. [PubMed] [Академия Google]

13. Чен Д.К., Ян Б.К., Куо Т.Т. Одностадийное превращение дрожжей в стационарную фазу. Карр Жене. 1992; 21:83–84. [PubMed] [Google Scholar]

14. Yamakawa M, Hishinuma F, Gunge N. Трансформация интактных клеток Saccharomyces cerevisiae полиэтиленгликолем. Сельскохозяйственная биохимия. 1985; 49: 869–871. [Google Scholar]

15. Hayama Y, Fukuda Y, Kawai S, Hashimoto W, Murata K. Чрезвычайно простой, быстрый и высокоэффективный метод трансформации дрожжей Saccharomyces cerevisiae с использованием глутатиона и клеток с ранней логарифмической фазой. J Biosci Bioeng. 2002; 94: 166–171. [PubMed] [Google Scholar]

16. Делорм Э. Трансформация Saccharomyces cerevisiae с помощью электропорации. Appl Environ Microbiol. 1989; 55: 2242–2246. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

17. Томпсон Дж. Р., Регистр Э., Куротто Дж., Курц М., Келли Р. Улучшенный протокол подготовки дрожжевых клеток к трансформации путем электропорации. Дрожжи. 1998; 14: 565–571. [PubMed] [Академия Google]

18. Суга М., Хатакеяма Т. Высокоэффективная электропорация путем замораживания интактных дрожжевых клеток с добавлением кальция. Карр Жене. 2003;43:206–211. [PubMed] [Google Scholar]

19. Johnston SA, Anziano PQ, Shark K, Sanford JC, Butow RA. Трансформация митохондрий в дрожжах путем бомбардировки микроснарядами. Наука. 1988; 240:1538–1541. [PubMed] [Google Scholar]

20. Морено С., Клар А., Медсестра П. Молекулярно-генетический анализ делящихся дрожжей Schizosaccharomyces pombe . Методы Энзимол. 1991; 194: 795–823. [PubMed] [Google Scholar]

21. Okazaki K, Okazaki N, Kume K, Jinno S, Tanaka K, Okayama H. Метод высокочастотной трансформации и библиотеки трансдуцирующих векторов для клонирования кДНК млекопитающих путем транскомплементации Schizosaccharomyces pombe . Нуклеиновые Кислоты Res. 1990;18:6485–6489. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

22. Cregg JM, Barringer KJ, Hessler AY, Madden KR. Pichia pastoris в качестве хост-системы для трансформаций. Мол Селл Биол. 1985;5:3376–3385. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

23. Wu S, Letchworth GJ. Высокоэффективная трансформация путем электропорации Pichia pastoris , предварительно обработанного ацетатом лития и дитиотреитом. Биотехнологии. 2004; 36: 152–154. [PubMed] [Google Scholar]

24. Kurtz MB, Cortelyou MW, Kirsch DR. Интегративная трансформация Candida albicans с использованием клонированного гена Candida ADE2 . Мол Селл Биол. 1986; 6: 142–149. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

25. Herreros E, Garcia-Saez MI, Nombela C, Sanchez M. Реорганизованная последовательность ДНК Candida albicans , способствующая гомологичной неинтегративной генетической трансформации. Мол микробиол. 1992; 6: 3567–3574. [PubMed] [Google Scholar]

26. Sanglard D, Ischer F, Monod M, Bille J. Восприимчивость Candida albicans мутантов-переносчиков нескольких лекарств к различным противогрибковым агентам и другим ингибиторам метаболизма. Противомикробные агенты Chemother. 1996;40:2300–2305. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

27. Де Бакер М.Д., Маес Д., Вандонинк С., Логге М., Контрерас Р., Луйтен В.Х. Трансформация Candida albicans электропорацией. Дрожжи. 1999; 15:1609–1618. [PubMed] [Google Scholar]

28. Tilburn J, Scazzocchio C, Taylor GG, Zabicky-Zissman JH, Lockington RA, Davies RW. Трансформация путем интеграции в Aspergillus nidulans . Ген. 1983; 26: 205–221. [PubMed] [Google Scholar]

29. Dawe AL, Willins DA, Morris NR. Повышена эффективность трансформации Протопласты Aspergillus nidulans в присутствии дитиотреитола. Анальная биохимия. 2000; 283:111–112. [PubMed] [Google Scholar]

30. Lubertozzi D, Keasling JD. Разработка Aspergillus в качестве хозяина для гетерологичной экспрессии. Биотехнология Adv. 2009; 27:53–75. [PubMed] [Google Scholar]

31. Китамото К. Молекулярная биология плесени Koji . Adv Appl Microbiol. 2002; 51: 129–153. [PubMed] [Google Scholar]

32. Санчес О., Агирре Дж. Эффективное преобразование Aspergillus nidulans путем электропорации проросших конидий. Информационный бюллетень по генетике грибов. 1996; 43:48–51. [Google Scholar]

33. Barcellos FG, Fungaro MH, Furlaneto MC, Lejeune B, Pizzirani-Kleiner AA, de Azevedo JL. Генетический анализ нестабильных трансформантов Aspergillus nidulans , полученных биолистическим способом. Может J Microbiol. 1998;44:1137–1141. [PubMed] [Google Scholar]

34. Gouka RJ, Gerk C, Hooykaas PJ, Bundock P, Musters W, Verrips CT, et al. Трансформация Aspergillus awamori по Agrobacterium tumefaciens -опосредованная гомологичная рекомбинация. Нац биотехнолог. 1999; 17: 598–601. [PubMed] [Google Scholar]

35. Kawai S, Pham TA, Nguyen HT, Nankai H, Utsumi T, Fukuda Y, et al. Молекулярный анализ доставки ДНК в Saccharomyces cerevisiae . Biochem Biophys Res Commun. 2004; 317:100–107. [PubMed] [Google Scholar]

36. Kawai S, Phan TA, Kono E, Harada K, Okai C, Fukusaki E, et al. Транскрипционный и метаболический ответ у дрожжей Клетки Saccharomyces cerevisiae во время полиэтиленгликоль-зависимой трансформации. J Основная микробиол. 2009; 49:73–81. [PubMed] [Google Scholar]

37. Zheng HZ, Liu HH, Chen SX, Lu ZX, Zhang ZL, Pang DW и др. Процесс трансформации дрожжей изучен методом флуоресцентной маркировки. Биоконьюг Хим. 2005; 16: 250–254. [PubMed] [Google Scholar]

38. Chen P, Liu HH, Cui R, Zhang ZL, Pang DW, Xie ZX и др. Визуальное исследование трансформации дрожжей, индуцированной Li ⁺ и полиэтиленгликоль. Таланта. 2008; 77: 262–268. [PubMed] [Google Scholar]

39. Gietz RD, Woods RA. Генетическая трансформация дрожжей. Биотехнологии. 2001; 30: 816–820. [PubMed] [Google Scholar]

40. Берк Д.Т., Карл Г.Ф., Олсон М.В. Клонирование больших сегментов экзогенной ДНК в дрожжи с помощью искусственных хромосомных векторов. Наука. 1987; 236: 806–812. [PubMed] [Google Scholar]

41. King CY, Wang HL, Chang HY. Трансформация дрожжей инфекционными прионными частицами. Методы. 2006;39: 68–71. [PubMed] [Google Scholar]

42. Norcum MT. Структурный анализ комплекса аминоацил-тРНК-синтетазы с высокой молекулярной массой. Воздействие нейтральных солей и детергентов. Дж. Биол. Хим. 1991; 266:15398–15405. [PubMed] [Google Scholar]

43. Ито Х., Мурата К., Кимура А. Трансформация дрожжевых клеток, обработанных 2-меркаптоэтанолом. Сельскохозяйственная биохимия. 1983; 47: 1691–1692. [Google Scholar]

44. Reddy A, Maley F. Дитиотреитол повышает эффективность трансформации дрожжей. Анальная биохимия. 1993;208:211–212. [PubMed] [Google Scholar]

45. Hill J, Дональд KA, Griffiths DE. Трансформация цельноклеточных дрожжей с усилением ДМСО. Нуклеиновые Кислоты Res. 1991;19:5791. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

46. Лауэрманн В. Этанол повышает эффективность трансформации интактных дрожжевых клеток. Карр Жене. 1991; 20:1–3. [PubMed] [Google Scholar]

47. Уивер Дж. К., Харрисон Г. И., Блисс Дж. Г., Мурант Дж. Р., Пауэлл К. Т. Электропорация: высокая частота возникновения преходящего состояния высокой проницаемости в эритроцитах и интактных дрожжах. ФЭБС лат. 1988;229:30–34. [PubMed] [Google Scholar]

48. Becker DM, Guarente L. Высокоэффективная трансформация дрожжей электропорацией. Методы Энзимол. 1991; 194: 182–187. [PubMed] [Google Scholar]

49. Klein TM, Wolf ED, Wu R, Sanford JC. Высокоскоростные микроснаряды для доставки нуклеиновых кислот в живые клетки. Природа. 1987; 327: 70–73. [Google Scholar]

50. Allshire RC. Введение больших линейных минихромосом в Schizosaccharomyces pombe с помощью усовершенствованной процедуры трансформации. Proc Natl Acad Sci USA. 1990;87:4043–4047. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

51. Морита Т., Такегава К. Простая и эффективная процедура трансформации Schizosaccharomyces pombe . Дрожжи. 2004; 21: 613–617. [PubMed] [Google Scholar]

52. Суга М., Хатакеяма Т. Быстрая и простая процедура высокоэффективной трансформации криоконсервированных клеток Schizosaccharomyces pombe ацетатом лития. Дрожжи. 2005; 22: 799–804. [PubMed] [Google Scholar]

53. Рамон А.М., Фонзи В.А. Генетическая трансформация Кандида альбиканс . Методы Мол Биол. 2009; 499: 169–174. [PubMed] [Google Scholar]

54. Munn AL. Молекулярные требования к этапу интернализации эндоцитоза: выводы из дрожжей. Биохим Биофиз Акта. 2001; 1535: 236–257. [PubMed] [Google Scholar]

55. Engqvist-Goldstei AEY, Drubin DG. Сборка актина и эндоцитоз: от дрожжей до млекопитающих. Annu Rev Cell Dev Biol. 2003; 19: 287–332. [PubMed] [Google Scholar]

56. Гели М.И., Ризман Х. Эндоцитарная интернализация в клетках дрожжей и животных: сходство и различие. Дж. Клеточные науки. 1998;111:1031–1037. [PubMed] [Google Scholar]

57. Girao H, Geli MI, Idrissi FZ. Актин в эндоцитарном пути: от дрожжей к млекопитающим. ФЭБС лат. 2008; 582:2112–2119. [PubMed] [Google Scholar]

58. Winter DC, Choe EY, Li R. Генетическая диссекция комплекса Arp2/3 почкующихся дрожжей: сравнение in vivo и структурных ролей отдельных субъединиц. Proc Natl Acad Sci USA. 1999;96:7288–7293. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

59. Toshima J, Toshima JY, Martin AC, Drubin DG. Фосфорегуляция Arp2/3-зависимой сборки актина во время рецептор-опосредованного эндоцитоза. Nat Cell Biol. 2005; 7: 246–254. [PubMed] [Академия Google]

60. Toi H, Fujimura-Kamada K, Irie K, Takai Y, Todo S, Tanaka K. She4p/Dim1p взаимодействует с моторным доменом нетрадиционных миозинов у почкующихся дрожжей, Saccharomyces cerevisiae . Мол Биол Селл. 2003; 14: 2237–2249. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

61. Халил И.А., Когуре К., Акита Х., Харашима Х. Пути поглощения и последующий внутриклеточный перенос при невирусной доставке генов. Pharmacol Rev. 2006; 58:32–45. [PubMed] [Google Scholar]

62. Коннер С.Д., Шмид С.Л. Регулируемые порталы входа в камеру. Природа. 2003; 422:37–44. [PubMed] [Академия Google]

63. Rejman J, Bragonzi A, Conese M. Роль эндоцитоза, опосредованного клатрином и кавеолами, в переносе генов, опосредованном липо- и полиплексами. Мол Тер. 2005; 12: 468–474. [PubMed] [Google Scholar]

64. Rejman J, Conese M, Hoekstra D. Перенос генов с помощью липо- и полиплексов: роль эндоцитоза, опосредованного клатрином и кавеолами. J липосом рез. 2006; 16: 237–247. [PubMed] [Google Scholar]

65. Фон Герсдорф К., Сандерс Н.Н., Ванденбрук Р., Де Смедт С.К., Вагнер Э., Огрис М. Путь интернализации, приводящий к успешной экспрессии генов, зависит как от клеточной линии, так и от типа полиэтилениминового полиплекса. Мол Тер. 2006; 14: 745–753. [PubMed] [Академия Google]

66. Hufnagel H, Hakim P, Lima A, Hollfelder F. Эндоцитоз в жидкой фазе способствует трансфекции ДНК с помощью PEI-25. Мол Тер. 2009;17:1411–1417. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

67. Thevelein JM, de Winde JH. Новые механизмы восприятия и мишени для пути цАМФ-протеинкиназы А в дрожжах Saccharomyces cerevisiae . Мол микробиол. 1999; 33: 904–918. [PubMed] [Google Scholar]

68. Tomlin GC, Hamilton GE, Gardner DC, Walmsley RM, Stateva LI, Oliver SG. Подавление зависимости от сорбита у штамма, несущего мутацию в гене 9Ген 0009 SRB1/PSA1/VIG9 , кодирующий GDP-маннозопирофосфорилазу посредством сверхэкспрессии PDE2 , предполагает роль пути передачи сигнала Ras/цАМФ в контроле биогенеза клеточной стенки дрожжей. Микробиология. 2000;146:2133–2146. [PubMed] [Google Scholar]

69. Suzuki C, Shimma YI. Мутанты АТФазы P-типа spf1 демонстрируют новый механизм устойчивости к киллерному токсину SMKT. Мол микробиол. 1999; 32: 813–823. [PubMed] [Google Scholar]

70. Кронин С.Р., Рао Р., Хэмптон Р.Ю. Cod1p/Spf1p представляет собой АТФазу P-типа, участвующую в функции ER и Ca ²⁺ гомеостаз. Джей Селл Биол. 2002; 157:1017–1028. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

71. Durr G, Strayle J, Plemper R, Elbs S, Klee SK, Catty P, et al. Медиальный ионный насос Гольджи Pmr1 снабжает секреторный путь дрожжей Ca ²⁺ и Mn ²⁺, необходимыми для гликозилирования, сортировки и деградации белка, связанного с эндоплазматическим ретикулумом. Мол Биол Селл. 1998; 9: 1149–1162. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

72. Gurrieri S, Wells K, Johnson I, Bustamante C. Прямая визуализация отдельных молекул ДНК с помощью флуоресцентной микроскопии: характеристика факторов, влияющих на сигнал/фон, и оптимизация визуализации условия с помощью YOYO. Анальная биохимия. 1997;249:44–53. [PubMed] [Google Scholar]

73. Rye H, Yue S, Wemmer D, Quesada M, Haugland R, Mathies R, et al. Стабильные флуоресцентные комплексы двухцепочечной ДНК с бис-интеркалирующими асимметричными цианиновыми красителями: свойства и применение. Нуклеиновые Кислоты Res. 1992; 20:2803–2812. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

74. Фам Т.А., Каваи С., Коно Э., Мурата К. Роль клеточной стенки, выявленная визуализацией трансформации Saccharomyces cerevisiae . Карр микробиол. 2010 г.: 10.1007/s00284-010-9807-й. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

75. Boni L, Stewart T, Alderfer J, Hui S. Взаимодействие липидов с полиэтиленгликолем: II. Образование дефектов в бислоях. J Membr Biol. 1981; 62: 71–77. [PubMed] [Google Scholar]

76. Tilcock C, Fisher D. Взаимодействие фосфолипидных мембран с полиэтиленгликолем. Биохим Биофиз Акта. 1979; 557: 53–61. [PubMed] [Google Scholar]

77. Yamazaki M, Ohnishi S, Ito T. Осмоэластическая связь в биологических структурах: снижение текучести мембран и осмофобная ассоциация фосфолипидных везикул в ответ на осмотический стресс. Биохимия. 1989;28:3710–3715. [PubMed] [Google Scholar]

78. Aldwinckle T, Ahkong Q, Bangham A, Fisher D, Lucy J. Влияние полиэтиленгликоля на липосомы и эритроциты. Изменения проницаемости и слияние мембран. Биохим Биофиз Акта. 1982; 689: 548–560. [PubMed] [Google Scholar]

79. Melchior F, Gerace L. Механизмы импорта ядерных белков. Curr Opin Cell Biol. 1995; 7: 310–318. [PubMed] [Google Scholar]

Новый взгляд на механизмы, участвующие в бактериальной трансформации, вызванной хлоридом кальция

Бактериальная трансформация является важной частью процесса клонирования и широко использовалась во многих исследованиях (Swords, 2003; Gigova et al. , 2006). Механизм характеризуется двумя фазами, первая фаза включает в себя поглощение ДНК через клеточную оболочку, а вторая фаза включает создание ДНК в клетке в качестве стабильного генетического материала (Hanahan, 1983). Процедура трансформации имеет физико-химическую природу, а не строго химическую или физическую процедуру, поскольку клетки манипулируют катионами (или комбинацией катионов) и температурным дисбалансом, чтобы сделать их способными поглощать чужеродную ДНК. Общеизвестно, что химическая манипуляция связана с индукцией компетентности, в то время как физическая манипуляция связана с поглощением чужеродной ДНК. Два метода действуют вместе, чтобы вызвать акт «интернализации искусственной ДНК».

Со временем для придания клеткам компетентности использовались различные методы, такие как использование диметилсульфоксида (ДМСО), двухвалентных катионов или полиэтиленгликоля (ПЭГ) (Klebe et al., 1983; Chan et al., 2013). Помимо этих химических методов, электропорация также была испытана и использовалась для индукции компетентности (Dower et al. , 1988; Yoshida and Sato, 2009; Liu et al., 2013). Использование двухвалентных катионов было наиболее эффективной химической обработкой, вызывающей трансформацию (Day, 2004). Среди различных катионов двухвалентный катион кальция (Ca ²⁺ ) оказался наиболее эффективным (Weston et al., 1981) как в отдельности (Dagert, Ehrlich, 1979), так и в различных комбинациях. Комбинация двухвалентных и одновалентных ионов, таких как кальций и магний (Taketo, 1974; Wensink et al., 1974), кальций и марганец (Enea et al., 1975), кальций, рубидий и диметилсульфоксид (Kushner, 1978) и другие щелочные металлы при длительной инкубации при 0°C (Taketo, 1972; Dagert and Ehrlich, 1979) также оказались эффективными (Roychoudhury et al., 2009).). Как правило, все двухвалентные катионы усиливают процесс превращения. Ханахан (1983) обнаружил, что присутствие магния в культуральной среде бактерий увеличивает эффективность трансформации в 15-20 раз по сравнению с клетками, выращенными без магния. Он также заметил, что добавление магния в среду за 30 мин до сбора клеток также усиливает трансформацию до ~60%. Однако добавление магния по мере того, как клетки собирают и инкубируют на льду, усиливает трансформацию примерно на 40%. Добавление ионов кальция или марганца также показало почти такой же стимулирующий эффект, как ионы магния (Hanahan, 19).83). Однако следует оптимизировать время инкубации с хлоридом кальция или любым другим двухвалентным катионом. Было замечено, что инкубация в течение 24 ч в холодном хлориде кальция делает бактериальные клетки в 20–30 раз более компетентными и в 4–6 раз более эффективными для трансформации по сравнению с клетками, полученными сразу после обработки CaCl ₂ (Blattner и др., 1977; Дагерт и Эрлих, 1979). Кертисс и др. (1977) экспериментировали на E. coli , штамм X1776, и наблюдали влияние различных наборов условий на эффективность трансформации. Он обработал бактериальную культуру комбинацией ионов марганца, кальция, рубидия и калия вместе с ДМСО и сахарозой при 0°C с последующим тепловым импульсом при 42°C. Однако эти условия не дали успешных результатов, когда другие штаммы E. coli (Hanahan, 1983). Мезельсон и Юань (1968) сочли эти условия более перспективными для успешной трансформации в случае штамма E. coli MM294, чем стандартный протокол «хлорида кальция». Боливар и др. (1977) сообщил о 10 ⁶ трансформантов, когда клетки обрабатывали одним кальцием, в то время как Kushner (1978) сообщил о получении 10 ⁷ трансформантов после обработки клеток рубидием вместе с хлоридом кальция. Норгард и др. (1978) также смог получить 10 ⁷ трансформантов с помощью метода, использованного Kushner (1978) в случае штамма K-12 X1776 из E. coli . Однако выход трансформантов варьируется от вида к виду и от штамма к штамму (Mercer and Loutit, 1979). Об этом сообщили Sjöström et al. (1972), что оптимальная концентрация хлорида кальция для поглощения ДНК S. aureus составляет 0,1 М CaCl ₂ . Эти двухвалентные катионы преодолевают отталкивание между чужеродной ДНК и бактериальной клеткой, обусловленное наличием на них обоих отрицательных зарядов. Это применимо как к линейным фрагментам ДНК, так и к кольцевым молекулам ДНК, таким как плазмиды (Мандель и Хига, 19).70; Цен и др., 2002). Считается, что двухвалентные катионы связываются как с клеткой, так и с ДНК, полностью нейтрализуя заряд. Кальций, связанный с ДНК, дополнительно помогает ДНК адсорбироваться компетентной клеткой (Panja et al., 2008b). Более того, ДНК-связывающие белки, присутствующие в клеточной мембране, также могут способствовать этому взаимодействию. Закрепление ДНК на мембране устраняет риск отделения или изгнания ДНК (Clark et al., 2002). Кроме того, низкие температуры, используемые в протоколах трансформации, замораживают липидную часть и, следовательно, ограничивают текучесть клеточной мембраны, что усиливает взаимодействие кальция с поверхностью клетки. Таким образом, ионы кальция, связанные с клеточной поверхностью, а также с чужеродной ДНК, доставляют ДНК в клетку. Кларк и др. (2002) показали, что относительная ассоциация двухвалентных катионов (например, Ca ²⁺ ) в большей степени связан с клеточной мембраной по сравнению с его ассоциацией с чужеродной ДНК, тогда как некоторые трехвалентные катионы (например, спермидин) легче взаимодействуют с ДНК (Li et al. , 2004). В этом исследовании также сообщалось, что Ca ²⁺ играет более выраженную роль в развитии компетентности по сравнению со спермидином или трехвалентными катионами (Clark et al., 2002). Мембраны очень легко поглощают кальций, и, оказавшись внутри клетки, ионы кальция нейтрализуются мембранными фосфатами, присутствующими на цитозольной стороне (Melcrová et al., 2016). Связывание ионов кальция с мембраной также вызывает изменение проницаемости мембраны (Li et al., 2004).

Лечение двухвалентными или тривалентными веществами на льду сопровождается воздействием повышенной температуры в виде теплового шока, вызывающего температурный дисбаланс. Молекулы с повышенным броуновским движением вне клетки, вероятно, толкают молекулу ДНК внутрь клетки. Однако неясно, достаточно ли этой кинетической силы, чтобы протолкнуть адсорбированные молекулы ДНК внутрь. Панжа и др. (2008a) изучали эффективность циклов охлаждения и нагрева, увеличивая количество циклов до достижения максимальной эффективности преобразования. Был сделан вывод, что понижение температуры фактически способствует потере белка, в то время как нагревание способствует потере липидов, и, таким образом, вместе эти циклы повышают эффективность трансформации (Panja et al., 2008a), поскольку увеличивается размер пор на поверхности клетки. Более того, из-за потери липидов и белков мембрана деполяризуется, еще больше уменьшая отталкивание между молекулой ДНК и мембраной. Кроме того, плотность клеток также может влиять на эффективность трансформации, и сообщалось, что максимальная компетентность наблюдается при плотности клеток в диапазоне от 10 9от 0121 7 до 10 ⁸ клеток мл в логарифмической фазе (Taketo, 1974; Norgard et al., 1978).

Однако остается вопрос; образуются ли поры (через которые чужеродная ДНК входит в клетку) в результате обработки кальцием или они присутствуют естественным образом. В мембране существуют естественные каналы, часто называемые мостиками Байера, которые могут служить потенциальным путем для поглощения ДНК (Dreiseikelmann, 1994; Sperandeo et al. , 2007; Srivastava, 2013). Hanahan (1983) утверждал, что компетентные клетки имеют много сайтов или каналов, и все эти сайты и каналы имеют независимый шанс принять участие в поглощении ДНК, продвигаясь к процессу трансформации. Все клетки, независимо от того, компетентные они или нет, конкурируют за поглощение плазмиды, но если для трансформации использовать только компетентные клетки, эффективность будет увеличена до 50 раз, как обсуждает Ханахан (19).83). Фактор захвата ДНК представляет собой сумму всех вероятностей захвата ДНК через каждый канал. Сообщалось, что шансы на трансформацию увеличиваются не за счет увеличения концентрации ДНК, а за счет увеличения числа каналов, по которым происходит поглощение ДНК (Hanahan, 1983; Nikaido and Vaara, 1985). Более того, кальций играет в этом процессе двоякую роль; он не только нейтрализует заряд, но и ослабляет клеточную мембрану, вызывая инвагинации (Stein, 1990; Thomas and Rice, 2014).

Хотя было известно, что двухвалентные катионы помогают нейтрализовать заряд, комплексные ионы также могут служить для создания статической силы притяжения внутри молекулы ДНК. Это приводит к свертыванию ДНК в компактную шарообразную структуру, что облегчает ее проникновение в клетку (Clark et al., 2002). Суперскрученная шарообразная структура плазмиды будет иметь больше шансов войти в компетентную клетку для трансформации, чем удлиненная открытая кольцевая форма плазмиды. Однако если размер ДНК приближается к размеру поры, вероятность трансформации резко снижается. При использовании спермидина или других тривалентов размер шарообразной структуры ДНК может превышать размер пор в клеточной мембране, что можно решить только путем изменения физических параметров, используемых в протоколе, в первую очередь циклов нагрева и охлаждения. Независимо от того, используете ли вы двухвалентные или трехвалентные соединения, их концентрации должны быть оптимизированы таким образом, чтобы все фосфаты ДНК не становились недоступными, поскольку некоторые части ДНК должны адсорбироваться на поверхности клетки, а для этого требуются свободные фосфаты, как предполагает Панджа. и другие. (2008б).

На эффективность трансформации сильно влияет тип клетки-хозяина, поскольку они имеют различную структуру клеточной поверхности, особенно в отношении О-полисахаридов, которые выступают с поверхности клетки. Эти поверхностные структуры взаимодействуют с двухвалентными катионами и ДНК, что делает клетку способной к трансформации. Сообщалось, что разные штаммы E. coli , как обсуждалось выше, демонстрируют различия в эффективности трансформации из-за различий в химических свойствах их клеточной оболочки (Taketo, 19).72). Очень плотный О-полисахарид станет препятствием для прохождения ДНК. Однако также утверждалось, что интенсивное удаление LPS путем чрезмерной предварительной обработки этанолом снижает эффективность трансформации (Roychoudhury et al., 2009). Это можно объяснить упомянутой выше гипотезой о том, что ДНК сначала прикрепляется к какому-то внешнему компоненту клеточной мембраны, что затем способствует ее движению внутри клетки. Наряду с плотностью состав О-полисахарида также играет роль в рецепции поступающей молекулы ДНК (Lacks, 1977). Кроме того, ионы кальция также взаимодействуют с мембраной, и при концентрации CaCl ₂ 100 мМ почти весь кальций поглощается фосфатидилхолином и фосфатидилсерином клеточной мембраны (Melcrová et al., 2016). Следовательно, свойства мембраны играют важную роль в адсорбции ДНК.

Имеющиеся данные ясно указывают на то, что физические и химические обработки, используемые во время трансформации, т. е. температурный дисбаланс и обработка CaCl ₂, помогают преодолеть барьеры для поглощения ДНК, такие как отталкивание заряда и размеры пор (рис. 1). Комбинации магния и кальция редко используются в протоколах трансформации, важность которых следует учитывать. Можно предложить комбинацию двухвалентных и трехвалентных катионов с увеличенным временем инкубации для повышения эффективности трансформации; поскольку в дополнение к стабилизации заряда трехвалентные катионы могут уплотнять ДНК, что еще больше способствует ее интернализации. Бактериальные клетки также можно выращивать в присутствии CaCl9. 0239 2 и MgCl ₂, прежде чем вызывать компетентность. Циклы нагрева и охлаждения, используемые только один раз в протоколах трансформации, также могут быть увеличены до трех раз для повышения эффективности трансформации. Эти условия необходимо корректировать и оптимизировать для разных видов и штаммов бактерий из-за различий в свойствах их поверхности. Однако необходимы конкретные доказательства, основанные на экспериментах, предназначенных исключительно для выяснения этого явления.

Рисунок 1 . показаны барьеры/ограничения в поглощении ДНК бактериальной клеткой, а именно; отталкивание, вызванное отрицательными зарядами на клеточной мембране и ДНК и пористостью мембраны. На них манипулируют химической обработкой, такой как ионы кальция, которые нейтрализуют отрицательные заряды. Физические параметры могут применяться для улучшения пористости и проницаемости.

Вклад авторов

AA и HM составили рукопись. Ю.Р. выдвинул идею рукописи и отредактировал рукопись до окончательного вида. RT помог написать рукопись.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Ссылки

Blattner, F.R., Williams, B.G., Blechl, A.E., Denniston-Thompson, K., Faber, H.E., Furlong, L., et al. (1977). Фаги Харона: более безопасные производные бактериофага лямбда для клонирования ДНК. Наука 196, 161–169. doi: 10.1126/science.847462

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Боливар Ф., Родригес Р. Л., Грин П. Дж., Бетлах М. К., Хайнекер Х. Л., Бойер Х. В. и др. (1977). Строительство и характеристика новой машины для клонирования. II. Многоцелевая система клонирования. Ген 2, 95–113.

PubMed Abstract

Чан, В.-Т., Верма, К.С., Лейн, Д.П., и Ган, С.К. (2013). Сравнение и оптимизация методов и факторов, влияющих на трансформацию Кишечная палочка . Бионауч. Респ. 33:e00086. doi: 10.1042/BSR20130098

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Кларк Дж., Хадсон Дж., Мак Р., Макферсон К. и Цин К. (2002). Взгляд на эффективность трансформации в E. coli : исследование относительной эффективности E. coli в отношении поглощения плазмидной ДНК, обработанной сложными молекулярными трехвалентными катионами спермином или спермидином, в контексте протокола трансформации Ханахана. Дж. Эксп. микробиол. Иммунол . 2, 68–80.

Google Scholar

Curtiss, R. III, Inoue, M., Pereira, D., Hsu, J.C., Alexander, L., and Rock, L. (1977). «Создание и использование более безопасных штаммов бактерий-хозяев для исследования рекомбинантной ДНК», в Molecular Cloning of Recombinant DNA , eds WA Scott and R. Werner (Нью-Йорк, Нью-Йорк: Academic Press), 99–114.

Google Scholar

Дагерт М. и Эрлих С. (1979). Длительная инкубация в хлориде кальция повышает компетентность Клетки кишечной палочки . Ген 6, 23–28. doi: 10.1016/0378-1119(79)

-9

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Day, MJ (2004). «Трансформация», в Microbial Evolution , редакторы Р. В. Миллер и М. Дж. Дэй (Вашингтон, округ Колумбия: American Society of Microbiology Press), 158–172.

Google Scholar

Дауэр, В. Дж., Миллер, Дж. Ф., и Рэгсдейл, К. В. (1988). Высокоэффективная трансформация E. coli методом высоковольтной электропорации. Рез. нуклеиновых кислот . 16, 6127–6145. doi: 10.1093/nar/16.13.6127

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Драйзейкельманн, Б. (1994). Транслокация ДНК через бактериальные мембраны. Микробиолог. Ред. 58, 293–316.

Реферат PubMed | Google Scholar

Энеа В., Вовис Г. П. и Зиндер Н. Д. (1975). Генетические исследования с гетеродуплексной ДНК бактериофага f1. Асимметричная сегрегация, базовая коррекция и последствия для механизма генетической рекомбинации. Дж. Мол. биол. 96, 495–509. doi: 10.1016/0022-2836(75)-8

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Гигова Л., Петрова Н., Димова С. и Станева Д. (2006). Клонирование nifM-подобного гена из Sinorhizobium meliloti . Comptes rendus de l’Acad’emie bulgare des Sci. 59, 865–868.

Google Scholar

Ханахан, Д. (1983). Исследования по трансформации Escherichia coli плазмидами. Дж. Мол. биол. 166, 557–580. doi: 10.1016/S0022-2836(83)80284-8

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Клебе, Р. Дж., Харрис, Дж. В., Шарп, З. Д., и Дуглас, М. Г. (1983). Общий метод индуцированной полиэтиленгликолем генетической трансформации бактерий и дрожжей. Ген 25, 333–341. doi: 10.1016/0378-1119(83)-X

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Кушнер, С. Р. (1978). Улучшенный метод трансформации Escherichia coli плазмидами, производными ColEl . Амстердам: Эльзевир.

Лакс, С.А. (1977). Связывание и проникновение ДНК при бактериальной трансформации. Микробные взаимодействия (Receptors and Recognition, Series, B., Vol. 3). Лондон: Чепмен и Холл.

Li, W., Xie, H., Xie, Z., Lu, Z., Ou, J., Chen, X., et al. (2004). Изучение механизма развития компетентности у Escherichia coli с использованием квантовых точек в качестве флуоресцентных зондов. J. Biochem. Биофиз. Методы 58, 59–66. doi: 10.1016/S0165-022X(03)00154-4

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Liu, C., Xie X., Zhao, W., Liu, N., Maraccini, P.A., Sassoubre, L.M., et al. (2013). Проведение электропорации наногубками для доступной и высокоэффективной дезинфекции воды от бактерий и вирусов. Нано Летт. 13, 4288–4293. doi: 10.1021/nl402053z

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Мандель М. и Хига А. (1970). Заражение ДНК кальцийзависимых бактериофагов. Дж. Мол. биол. 53, 159–162. doi: 10.1016/0022-2836(70)

-3
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Мелкрова А., Покорна С., Пулланчери С., Кохаген М., Юркевич П., Хоф М. и др. (2016). Сложный характер взаимодействия катионов кальция с бислоями фосфолипидов. Науч. Реп. 6:38035. doi: 10.1038/srep38035
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Мерсер, А. А., и Лутит, Дж. С. (1979). Трансформация и трансфекция Pseudomonas aeruginosa : воздействие ионов металлов. J. Бактериол. 140, 37–42.
Реферат PubMed | Google Scholar
Мезельсон М. и Юань Р. (1968). Фермент рестрикции ДНК из E. coli . Природа 217, 1110–1114. doi: 10.1038/2171110a0
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Никайдо Х. и Ваара М. (1985). Молекулярные основы проницаемости внешней мембраны бактерий. Микробиолог. Rev. 49, 1.
PubMed Abstract | Google Scholar
Норгард, М. В., Ким, К., и Монахан, Дж. Дж. (1978). Факторы, влияющие на трансформацию штамма χ1776 Escherichia coli плазмидной ДНК pBR322. Ген 3, 279–292. doi: 10.1016/0378-1119(78)
-0
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Панджа С., Айх П., Яна Б. и Басу Т. (2008a). Как плазмидная ДНК проникает через клеточные мембраны в процессе искусственной трансформации Кишечная палочка ? Мол. член биол. 25, 411–422. doi: 10.1080/09687680802187765
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Панджа С., Айх П., Яна Б. и Басу Т. (2008b). Плазмидная ДНК связывается с коровым олигосахаридным доменом молекул ЛПС клеточной поверхности E. coli в процессе трансформации, опосредованной CaCl2. Биомакромолекулы 9, 2501–2509. doi: 10.1021/bm8005215
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Ройчоудхури, А. , Басу, С., и Сенгупта, Д. Н. (2009). Анализ сравнительной эффективности различных методов трансформации E. coli с использованием двух распространенных плазмидных векторов. Индиан Дж. Биохим. Биофиз . 46, 395–400.
Реферат PubMed | Google Scholar
Шёстрём, Дж.-Э., Линдберг, М., и Филипсон, Л. (1972). Трансфекция Staphylococcus aureus бактериофагом дезоксирибонуклеиновой кислотой. J. Бактериол. 109, 285–291.
Реферат PubMed | Google Scholar
Сперандео П., Ческутти Р., Вилла Р., Ди Бенедетто К., Кандия Д., Дехо Г. и др. (2007). Характеристика lptA и lptB, двух основных генов, участвующих в транспорте липополисахарида к наружной мембране Escherichia coli . J. Бактериол. 189, 244–253. doi: 10.1128/JB.01126-06
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Шривастава, С. (2013). Трансформация. Генетика бактерий. 902:42 Нью-Дели: Springer India.
Штейн, С. (1990). «Производство и анализ белков с помощью технологии рекомбинантной ДНК», в Fundamentals of Protein Biotechnology (CRC Press).
Google Scholar
Swords, WE (2003). «Химическая трансформация E. coli », в E. coli Plasmid Vectors: Methods and Applications , eds N. Casali and A. Preston (Totowa, NJ; Oxford: Humana; Blackwell), 49–53.
Google Scholar
Такето, А. (1972). Чувствительность Escherichia coli к вирусной нуклеиновой кислоте: v. компетентность обработанных кальцием клеток. Дж. Биохим . 72, 973–979. doi: 10.1093/oxfordjournals.jbchem.a129988
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
Такето, А. (1974). Чувствительность Escherichia coli к вирусной нуклеиновой кислоте. Дж. Биохим . 75, 895–904. doi: 10.1093/oxfordjournals.jbchem.a130463
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Томас, К. Дж., и Райс, К. В. (2014).