Posted on by — Leave a comment

Состав морилка: Морилка для дерева — виды, состав, особенности, нанесение

Содержание

Морилка для дерева — виды, состав, особенности, нанесение

  • Главная
  • Статьи
  • Морилка для дерева

Морилка для дерева выполняют функцию защитного покрытия для поверхности деревянного изделия. Она защищает от вредоносных бактерией, повышенной влажности воздуха и перепадов температуры. Также она делает цвет древесины более ярким и насыщенным. Морилка позволяет кардинально обновить деревянную поверхность любого изделия, в отличие от лака. Разнообразие видов средства дают особый эффект, который может преобразить мебель из дерева.

 

Использование морилки

Морилка для древесины действует довольно просто, как могло бы показаться:

Состав морилки с краской или без нее проникает в структуру древесины, за счет чего образуется защитная пленка как на поверхности, так и внутри структуры.

Волокна дерева приподнимаются естественным образом, за счет чего выделяется текстура древесины.

Естественные тона пропитки позволяют создать имитацию дорогих пород дерева даже на простых пиломатериалах.

 

 

Виды морилки для дерева

Морилка различается по основе, которая используется при изготовлении. Обычно выделяют

 

Водная морилка

Морилка на водной основе довольно распространенный вид. Ее часто используют в различных производствах и обработках. Морилку производят в готовом виде. Но также есть пропитка в порошке, которую необходимо растворить в воде.

Преимущества такой пропитки:

  • Безвреден для организма – не выделяет токсичных испарений
  • Многообразие оттенков – естественные цвета от светлых до темных тонов создает эффект дорогой древесины с природной текстурой. Изделие становится более ярким.
  • Легко наносится и не требует особых инструментов. Морилка расходуется экономно.
  • Невысокая цена делает морилку доступной для любого покупателя.

Однако есть и недостаток- волокна древесины поднимаются, за счет чего она становится уязвимой к влаге. Также она долго сохнет.

 

Спиртовая морилка

Морилка для дерева представляет собой анилиновый краситель, растворенный в денатурате. Средство производят в готовом и сухом виде.

В отличие от пропитки на водной основе, спиртовая морилка сохнет намного быстрее. Однако из-за этого нанесение морилки равномерно становится затруднительным делом. Для этого придется использовать пульверизатор, который сможет быстро и качественно обработать поверхность.

 

Масляная морилка

Морилка состоит из красящих пигментов, которые растворяются в масле. Это позволяет менять цвет деревянной мебели. Морилка хорошо впитывается в структуру дерева. Она легко наносится любыми ручными средствами. Состав равномерно проникаем в материал, не портит древесный рисунок.

Масляная морилка образует защитную пленку от внешних воздействий.

   

Акриловая или восковая морилка

Морилка для дерева на основе воска или акрила является совершенно новым видом пропитки для покрытия деревянных изделий. Помимо образования защитного слоя, такой вид морилки отличается расширенной цветовой палитрой. В магазинах можно увидеть средства разнообразных цветов от ярких до естественных оттенков.

Бейц – прием отделки, который используется при дизайне интерьеров. Суть заключается в сочетании натуральной текстуры дерева с неестественным цветом. Это нашло широкое применение в изготовлении мебели, деревянных лестниц и других предметов интерьера из массива дерева.

 

Отбеливающая морилка

Не всегда требуется сделать древесину более яркой и темной. В некоторых интерьерах преобладают белые оттенки. Поэтому для предметов интерьера из древесины применяют морилку, в составе которой содержатся кислоты или перекись водорода. Такой состав обесцвечивает материал.

Морилку на основе перекиси часто используют для подготовки изделия к последующей покраске.

 

Какие эффекты создают с помощью морилки

Спиртовая и водная морилки отлично подходят для создания эффекта естественного покрытия без применения обработки. Чтобы добиться того или иного оттенка дорогой древесины, следует подбирать соответствующее средство. Обычно производители указывают на упаковке, какой оттенок может создать морилка.

Дубовые и ясеневые изделия можно покрыть бесцветной морилкой, которая лишь подчеркнет естественный цвет и структуру.

Если провести морение дерева правильно, то сохранится природный вид поверхности. Но морилки на основе акрила и воска используют только при создании необычных сочетаний в интерьере.

Чтобы правильно подобрать морилку, следует рассмотреть цветовую палитру, которая представлена в магазинах в виде дощечек с покрытиями.

 

Технология нанесения морилки.

Морилка легко наносится на поверхность изделия. Провести обработку древесины этим средство довольно несложно, но необходимо делать это аккуратно. Важно, чтобы морилка была распределена равномерно.

 

 

Как лучше наносить морилку на поверхность: мастер-класс

  1. Распыление – самый простой и качественный вариант. Пропитка легко распределится по всей поверхности. Древесина равномерно преобразится в цвете. Это исключает образования следов и подтеков на изделии.
  2. Растирание морилки – классический способ для создания имитации древесины дуба на простом виде древесины. Для этого можно использовать ветошь. Состав требуется наносить очень аккуратно, поэтому спиртовая морилка не подойдет для такой обработки.
  3. Валик или тампон подходит для локального нанесения на поверхность древесины. Таким образом можно легко выделить текстуру среза и равномерно распределить защитный слой.
  4. Кисть — самый распространенный и бюджетный инструмент. Он удобен для нанесения морилки на любой основе, кроме спиртовой. Кисть легко распределяет средство по поверхности древесины в любом направлении. Также можно в отдельных участках придать больше цвета.  

Каким образом следует наносить морилку зависит от основы пропитки, вида материала изделия и объема работ. К каждому виду морилки предлагается инструкция с рекомендациями по нанесению.

 

Работа с дефектами

Что делать, если морилка легла не ровно?

 

Образовался затек

Затек покрывается лаком, который растворяет слой. После этого место с дефектом зачищается. Этот вариант подходит для своевременного обнаружения дефекта при покрытии.

Если морилка успела высохнуть, то потребуется растворитель. Поверхность также можно зачистить наждачной бумагой или рубанком.

 

Пятна

Если пятно образовалось на интерьерном изделии из массива, то его можно убрать с помощью рубанка. Такое может случиться, так как массива неравномерно впитывает состав. Если пятно образовалось на фанере, то снимается шпон.

Новое покрытие лучше производить гелиевой пропиткой, которая остается слоем на поверхности. Она равномерно ложится на материал, но очень долго высыхает. Равномерное распределение и отсутствие впитывание уменьшает ее расход.

состав, какие цвета выбрать и на водной основе? Какая лучше +Видео для чего нужна

С наступлением весны все владельцы приусадебных участков и частных домов полным ходом наводят порядок в своих жилищах. Кто-то начинает выкидывать старый хлам, мыть окна, а кто-то приступает сразу к самому важному – обработке всех деревянных поверхностей. Зачем же обрабатывать дерево? Дело в том, что со временем изделия из дерева, хоть и являются наиболее прочные и натуральные, претерпевают изменения. [contents]

Дерево может выцвесть под летними палящими лучами солнца, от обильных дождей может изменить свою форму и деформироваться, а так же под действием определенных бактерий и вовсе может начать гнить. Поэтому очень важно позаботиться обо всем деревянном еще весной, в преддверии лета.

Далее я поделюсь с вами с чего лучше всего начать и что именно нужно сделать, чтобы ваши изделия из дерева со временем не потеряли своей привлекательности. Эти советы применимы абсолютно ко всем изделиям из дерева: стены, пол, фасад дома и даже простые изделия.

Для решения проблем, о которых я говорил выше, возникающих во время эксплуатации деревянных изделий, есть одно старое и проверенное средство – морилка.

Морилка – это специальное жидкое средство, которое придает дереву заданный цвет, и подчеркивает естественную текстуру дерева, не перекрывая ее. Современные морилки к тому же позволяют продлить время эксплуатации дерева и обладают обеззараживающим эффектом. Главное преимущество морилки в том, что в отличии от красок и эмали она проникает глубоко внутрь древесины, и при этом не вредит натуральному рисунку и текстуре.

Далее мы рассмотрим виды морилок и можно ли сделать ее своими руками в домашних условиях.

Содержание:

  • 1 Шаг 1. Выбрать основу морилки
  • 2 Шаг 2. Способ нанесения морилки
    • 2.1 Шаг 3. Подготовка к нанесению
    • 2.2 Шаг 4. Нанесение морилки
    • 2.3 Шаг 5. Удаление излишек
      • 2.3.1 Шаг 6. Если во время нанесения произошли ошибки. Как исправить

Шаг 1. Выбрать основу морилки

Существует две разновидности: морилка водная и неводная. Вторая группа в свою очередь, делиться на спиртовую и масляную.

  1. Водная морилка

Такая морилка производится в готовом виде и в виде растворимого порошка.

Это самый распространенный вид с широким выбором оттенков (от самого светлого и до темного).

В зависимости от количества используемого порошка – изменяется интенсивность цвета морилки.

Плюсы: отсутствует резкий запах, поэтому ее спокойно можно применять внутри жилого помещения.

Но у водной морилки есть недостаток – при нанесении она как бы приподнимает волокна дерева, что увеличивает влаговосприимчивость дерева. Но это легко исправить. Так же у этого вида морилки время полного высыхания –12-14 часов.

Совет: Если вы выбрали этот вид морилки, то перед использованием, ваше деревянное изделие нужно обильно намочить, оставить на некоторое время, затем ошкурить и только потом приступить к работе.

Так же важно учитывать, что перед использованием такую морилку необходимо процедить, чтобы все частицы растворились.

  1. Спиртовая морилка

Этот вид морилки — раствор анилинового красителя. Как и морилка на водной основе, представлен в готовом виде и в виде растворимого порошка

Плюсы: Очень быстрое высыхание. Всего 20-30 минут, в связи с тем, что содержащийся в составе спирт очень быстро улетучивается.

Недостаток такой морилки — способность быстро высыхать, что в результате может дать пятна на вашем изделии.

 

Совет: Если вы выбрали этот вид морилки, то вам понадобится краскопульт, для ручного нанесения или же пневматического. Это поможет избежать возникновения пятен на вашем изделии.

 

  1. Масляная морилка

Этот вид морилки очень любят различные декораторы, потому что именно он помогает им добиваться различных всевозможных цветов деревянных изделий. Происходит это за счет смешивания красителей, которые растворяются в маслянистой среде. Они представлены только в сухом виде и для разведения используется «Уайт спирит». Масляная морилка самая простая в применении и неприхотливая.

Плюсы: наиболее экологичная, так как основа- чаще всего льняное масло. Достаточно быстро сохнет – 2-3 часа. Так же не поднимает волокна дерева и наносится без пятен.

Так же сейчас, с развитием новых технологий, стали появляться новые виды морилок: акриловая на водной основе и восковая. Эти пропитки были разработаны с учетом недостатков, присущим морилкам. Данные виды морилок отлично ложатся на деревянную поверхность, чаще всего их используют для поверхности деревянных полов.

Недостатки: Акриловая морилка достаточно дорогая. Так же важно помнить, что при нанесении более 2-х слоев акриловой морилки возможно появление пятен. Восковая не пропитывает дерево, а лишь создает защитный слой на поверхности.

Восковые морилки нельзя использовать перед обработкой древесины полиуретаном или двухкомпонентными лаками с эффектом кислотного отверждения.

Так же есть альтернативные виды морилки- например белая, которые также можно сделать своими руками. Этот вид морилок наиболее экологичный, дешевый и при этом обладает разнообразием натуральных оттенков.

Морилки для дерева бывают разных цветовых решений: под дуб, орех и другие породы. Покрыть ими не составляет труда, выбрав нужную гамму цвета. Также уже есть сухая морилка.

  1. Морилки из растений
  • Отвар коры лиственницы может придать красноватый оттенок. Особенно контрастно он проявляется на изделиях из березы.
  • Используя шелуху лука, так же можно добиться красноватого оттенка. Пригодно для светлого дерева.
  • Скорлупа грецкого ореха может дать разные оттенки, в зависимости от количества используемого порошка. Перед применением скорлупу мелко перемалывают, затем добавляют в кипящую воду, некоторое время варят и затем процеживают и добавляют пищевую соду. Если после нанесения такого раствора еще добавить раствор бихромата, то в итоге можно получить красноватый оттенок. Так же можно получить сероватый оттенок, для этого готовую поверхность необходимо обработать уксусной кислотой.
  • С использованием растительной морилки можно добиться даже черного оттенка, для этого необходимо использовать отвар и коры ольхи и дуба.
  • Коричневый оттенок можно получить, смешивая в одинаковых пропорциях коры дуба, ивы, ольховых сережек и скорлупы грецкого ореха. Все эти ингредиенты необходимо замочить в холодной воде, а затем довести до кипения. Некоторое время потомить, а после добавить ? чайной ложки соды и варить еще около 10 минут.
  • Придать дереву коричневый цвет так же можно с помощью отвара из коры яблони и оболочек ореха. Если нужно получить более темный тон, то в раствор можно добавить квасцы.
  • Так же добиться черного цвета можно с помощью отвара из вербы и коры ольхи.
  • Для золотисто-желтого оттенка, дерево необходимо обработать отваром из недоспелых плодов крушины.
  1. Морилки на основе чая, кофе и уксуса.
  • При использовании кофе можно получить различные оттенки коричневого. Для этого необходимо перемолотые зерна смешать с пищевой содой. Можно использовать и просто растворимый кофе. Необходимо крепко заварить и просто тщательно обработать дерево.
  • Чайная заварка так же придает тон, за счет тианина, который и дает натуральный коричневый цвет. Оттенок можно варьировать в зависимости от крепости чая.
  • Получить эффект черного дерева можно с помощью металлических деталей и уксуса. Мелкие железные детали заливают уксусом и оставляют в темном месте на минимум на два дня. Чем темнее вам нужен оттенок, тем дольше необходимо настаивать, максимум семь дней. Очень важно помнить, что такую обработку необходимо проводить на улице, из-за резкого запаха уксуса.
  • Для придания темно-коричневого и вишневого оттенка можно использовать раствор марганцовки. Для этого необходимо развести 50 г в 1 литре теплой воды, затем нанести на древесину, а затем, через пять минут протереть обработанную поверхность мягкой тряпкой. Такую процедуру можно повторить для придания более насыщенного оттенка. Но важно помнить, что после такой обработки деревянную поверхность нужно покрыть защитным составом, потому что марганцовка может выцвести на солнце.

Когда вы уже определились с выбором на какой основе морилку будете использовать, необходимо решить каким способом будет нанесена морилка.

Шаг 2. Способ нанесения морилки

Нанесение морилки на пол
  1. Морилка данным способом наносится на дерево краскопультом. Этот способ позволяет добиться более ровного распределения морилки, а значит и более ровной текстуры.
  2. Этим способом морилка наносится на деревянную поверхность и равномерно втирается по всей площади. Этот способ лучше всего подходит для пористых деревьев, но важно использовать не быстросохнущую морилку.
  3. Этот способ лучше всего подходит при обработке изделий с небольшой площадью, он лучше всего обеспечивает равное распределение морилки по всей поверхности и помогает избежать разводов.
  4. Если у вас нет краскопульта, то можно использовать обычную кисть, но такой метод может подойти не для всех видов морилки. Из плюсов – цвет получается более глубокий и насыщенный.

Когда вы определились с методом нанесения необходимо сделать цветопробу, чтобы понять, как будет взаимодействовать выбранная вами морилка с вашим деревом. После этого необходимо подготовить изделие к нанесению

Шаг 3. Подготовка к нанесению

Подготовка к нанесению происходить в несколько этапов:

  • Отшлифовка наждачной бумагой или шкуркой. Важно не переусердствовать, и не оставить на поверхности царапины.
  • Удаление пыли с поверхности
  • Обезжирить всю поверхность дерева.
  • Смочить, но не обильно, на влажную поверхность морилка ложиться лучше.

 

Шаг 4. Нанесение морилки

При нанесении важно соблюдать некоторые принципы, чтобы получить наилучший результат.

  1. Морилка наносится только по направлению текстуры древесины. Так же удаляются образовавшиеся излишки раствора.
  2. Морилку можно наносить в 2-3 слоя, для придания более глубоко оттенка.
  3. При нанесении 1 слоя необходимо использовать маленькое количество морилки, после высыхания поверхность необходимо еще раз ошкурить и придать гладкость.
  4. При нанесении лучше не заходить на уже окрашенные участки, наслоение приведет к неровному цвету.
  5. После того, как дерево высохло необходимо обработать грубой тканью. Направление наискосок или вдоль волокон.
  6. Если у вас большая поверхность, то лучше наносить морилку участками.
  7. Важно помнить, что масляные морилки сохнут не менее 3-х дней, водные всего 2-3 часа.
  8. Если вам необходимо разбавить морилку, чтобы сделать более жидкой, то для водной морилки необходимо использовать воду, для морилки на масляной основе – «Уайт-спирит».

Когда вся морилка высохла, необходимо удалить избыток, чтобы изделие было более текстурным и блестящим

Шаг 5. Удаление излишек

Для удаления излишек вам понадобится ацетон и объемная густая кисть.

  1. Наклоните деталь под углом.
  2. Установите деталь на материал, который будет впитывать (лучше всего подойдут бумажные полотенца).
  3. Намочите кисть в ацетоне.
  4. Кистью, смоченной в ацетоне, движениями сверху – вниз убрать излишки.
  5. Продолжать до тех пор, пока поверхность не получится более однородной.
  6. После просыхания – нанести лак.
Шаг 6. Если во время нанесения произошли ошибки. Как исправить

Так как морилку крайне сложно удалить, наносить ее необходимо предельно аккуратно.

Но если у вас возникли трудности, то их можно решить следующими способами:

  1. У вас образовались затеки. Вам необходимо сразу же максимально удалить слой морилки. Если морилка уже немного подсохла, то необходимо нанести сверху второй слой, и удалить сразу оба. Если она высохла полностью, то тут уже необходимо использовать растворитель. Если вам необходимо удалить полностью весь пигмент, то тут поможет только рубанок.
  2. На вашем изделии появились пятна. Это может произойти, если деревянная поверхность имеет неравномерную плотность. Для устранения этого дефекта, необходимо убирать слой рубанком

Вот и все, что необходимо знать о морилке. Конечно, мы напоминаем, что абсолютно все деревянные поверхности по разному реагируют на этот вид пропитки. Поэтому, чтобы избежать недоразумений, не забывайте делать цветопробу именно с вашим типом дерева и выбранной морилкой.

Что такое морилка для дерева: виды и применение

Дерево — один из самых доступных и распространённых материалов в нашем быту.

Деревянная мебель, шкафы, двери — всё это используется каждый день.

К сожалению, благородные породы дерева и шпона достаточно дороги, и в быту их часто имитируют при помощи морилки.

Что такое морилка для дерева, как её использовать и можно ли изготовить самостоятельно?

Содержание:

  • 1 Морилка — что это
  • 2 Состав морилки
  • 3 Как использовать, чтобы поверхность выглядела хорошо
  • 4 Дополнительные составы, с которыми используют морилку
  • 5 Уход за изделиями, покрытыми морилкой

Морилка — что это

Морилка по дереву

Морилка — это химическое покрытие древесины, которое изменяет цвет дерева, но сохраняет видимой его структуру.

Главное её отличие от лаков и лазурей, полупрозрачных полиролей и других покрытий древесины, оставляющих текстуру видимой — она практически не образует поверхностного слоя.

Почти весь окрашивающий состав морилки впитывается в дерево, производя так называемое протравное окрашивание.

Однако это далеко не полный ответ на вопрос, что такое морилка для дерева. Морилки различают по своим составам, по способу нанесения и другим свойствам. Обычно дерево имеет более светлый цвет, чем требуется и нужно затемнить древесину. Иногда необходимо придать красноватый или синеватый оттенок.

Чаще всего имитируют красное дерево, чёрное дерево. Многие породы древесины плохо поддаются имитации при помощи морилки, так как имеют оригинальную текстуру. В таком случае для имитации ценной породы необходимо провести не просто окрашивание, но и дополнительно альфрейные работы.

Само название «морилка» происходит от морёного дуба — древесины дуба, которая длительное время пролежала под водой и приобрела коричневато-синеватый оттенок. Именно этот цвет большинство составов в обычных магазинах и пытаются имитировать.

Обычно морилку можно приобрести в магазине, она там представлена несколькими видами. Чаще всего продаётся чёрная и коричневая, стоит она недорого. В более дорогом ценовом сегменте можно встретить не обычные морилки, но специальные составы, с помощью которых можно имитировать породы дерева более точно.

Кроме того, эти составы могут обладать дополнительными свойствами — например, водоотталкивающими или предотвращающими гниение древесины.

Состав морилки

Оттенки морилки

Химический состав морилки образован из двух частей — основы и колера.

При нанесении состава на деревянную поверхность основа проникает вглубь, увлекая за собой частицы колера.

В дальнейшем основа может полностью связываться с древесиной или испаряться.

К испаряющимся основам относят водную и спиртовую. К связывающим — акрил, воск и масла. Как правило, морилка для дерева, цена за которую не очень высока, приготовлена на водной основе:

  • Основа морилки может быть простой и сложной. Современные технологии на химическом заводе позволяют делать морилку достаточно прочной, долговечной и использовать те основы, которые раньше не применялись вовсе. Вообще же изготовить морилку и сымитировать при помощи неё благородную породу древесины для многих столяров прошлого было очень выгодно. Поэтому существует целый ряд кустарных рецептов приготовления морилки. Действительно же хорошие рецепты держались в секрете.
  • Вторая часть, которая является непременным компонентом морилки — это краситель. Именно он определяет конечный облик поверхности. В качестве красителя используют как естественные, так и искусственные материалы. Из естественных в самодельных морилках часто использовали луковую шелуху, составы на основе канифоли, крепкий раствор кофе и другие красители. Искусственные красители намного интереснее, так как позволяют получить большую гамму цветов.

Как определить подходящую морилку для дерева и где её купить? Как правило, качественная морилка стоит достаточно дорого — дороже, чем просто краска для древесины. Приобретать её лучше всего в специализированных магазинах, использовать продукцию известных фирм.

Ведь, если сделать некачественное покрытие — можно испортить всё изделие, так как она проникает достаточно глубоко в слои древесины.

Часто в состав её входят дополнительные вещества, например, закрепители, которые препятствуют выгоранию колера на солнце и разрушению вследствие истирания. Также часто можно встретить вещества, которые образуют тонкую плёнку на поверхности дерева, дающую глянец и предохраняющую её от царапин.

Как использовать, чтобы поверхность выглядела хорошо

Чтобы нанести морилку качественно, достаточно следовать довольно простой инструкции:

  • Поверхность дерева тщательно шлифуется, удаляются все царапины, рытвины и механические повреждения.
  • Для получения качественной текстуры, которая будет видна под морилкой, рекомендуется обрабатывать поверхность не шкуркой или другими абразивами, а циклевать.
  • Поверхность древесины очищается от пыли и загрязнений.
  • Подготавливается морилка в соответствии с инструкцией от производителя. Лучший результат получается, если морилку предварительно подогреть.
  • В случае работы со спиртовыми составами необходимо открыть все окна в помещении во избежание неприятного запаха.
  • Состав наносится на поверхность древесины при помощи губки, кисти, валика. Удобнее всего пользоваться губкой.
  • В некоторых случаях производят полировку поверхности сразу после нанесения.
  • Поверхности дерева дают высохнуть. Сушка обычно производится естественная.
  • Производится обработка дополнительными составами или нанесение последующих слоёв морилки, если это нужно.

Лучше всего приобрести морилку в несколько большем количестве, чем это необходимо, и если для обработки будет использоваться несколько бутылок, желательно перед этим смешать их все вместе. Делается это потому, что составы и цвет морилки от партии к партии и даже от одной бутылки к другой могут немного отличаться.

Перед нанесением на поверхность изделия нужно опробовать морилку на небольшом кусочке древесины из той же породы. Если результат устраивает — обрабатывают изделие также, как обрабатывали до этого пробный образец.

Дополнительные составы, с которыми используют морилку

Полирование дерева после морения

Всего существует два дополнительных способа декоративной обработки изделий, покрытых морилкой — это покрытие изделия лаком и полировка при помощи различных политур.

Политура сама по себе может содержать в своём составе окрашивающие составы, которые изменяют цвет морилки, создают дополнительную игру и подчёркивают фактуру древесины.

Однако полировка потребует от мастера-мебельщика большого искусства.

Гораздо проще нанести поверх морилки защитный лак или лазурь. Они продлят срок службы дерева, однако фактура древесины будет выглядеть не так естественно. Впрочем, если использовать качественный лак, то древесина, покрытая морилкой, получит дополнительный шарм и непосвящённому станет практически невозможно отличить настоящее благородное дерево от сосны или ели, покрытой слоем морилки.

Дополнительно поверхность древесины может обрабатываться составами против гниения и составами против насекомых-древоточцев. Необходимо учесть, что эти составы могут изменить цвет морилки. Поэтому лучше всего изначально приобрести морилку с защитными свойствами.

Уход за изделиями, покрытыми морилкой

Изделия, которые покрывают морилкой, требуют того же ухода, что и обычная древесина. После окончательной сушки поверхность обработанной древесины можно протирать слегка влажной тряпкой, пылесосить, удалять пыль. Применять какие-то химические вещества для очистки поверхности нежелательно.

Как наносить морилку на дерево — можно узнать из видеоматериала:

Заметили ошибку? Выделите ее и нажмите Ctrl+Enter, чтобы сообщить нам.


  • Рубрики
  • Теги
  • Похожие записи
  • Автор

Морилка своими руками — виды и методы изготовления

Морилка (другое название — бейц) — это тонирующий состав, предназначенный для изменения естественного цвета и подчеркивания природной текстуры изделий из древесины. Пропитывающий состав проникает глубоко в древесную структуру — гораздо глубже, чем может проникнуть лак, эмаль или краска. Можно приобрести морилку в магазине или сделать ее самостоятельно. Морилка своими руками может быть изготовлена в соответствии с рецептами, указанными в этой статье.

Содержание:

  • Функции морилок
  • Виды морилок
  • Водная основа
  • Спиртовая основа
  • Масляная основа
  • Акриловая основа
  • Восковая основа
  • Народные рецепты производства морилки
  • Растительные морилки
  • org/ListItem»> Составы на основе чая, кофе и уксуса
  • Составы на основе химикатов
  • Отбеливающие составы
  • Методы обработки морилкой
  • Полезные советы мастерам
  • Потенциальные проблемы

Функции морилок

Бейцы используются для обработки не только деревянных поверхностей, но и ДВП, ДСП, МДФ и фанеры. Современные составы, помимо своего основного предназначения, обладают обеззараживающими характеристиками и продлевают жизнь деревянных изделий. Растворы на основе алкидов, масел и растворителей позволяют избежать заплесневения и отпугивают вредных насекомых.

Порой морилки применяются для сокрытия настоящей породы дерева. С помощью бейца можно имитировать дорогую породу древесины (к примеру, дуб), окрасив им обычную сосну. Кроме того, пропитыванием можно акцентировать натуральную древесную текстуру. Если правильно использовать несколько бейцев, можно скомбинировать разнообразные оттенки в едином художественном замысле и превратить деревянное изделие в произведение искусства.

к содержанию ↑

Виды морилок

Классификация морилок осуществляется по основам, из которых производятся растворы. Обычно бейцы изготавливаются на базе воды, спирта, масла, акрила или воска. Ниже подробнее рассмотрим каждую из перечисленных основ.

Водная основа

Морилки на основе воды производятся двух разновидностей:

  • сухой порошок для смешивания его с водой;
  • готовый к применению водный раствор.

Основной недостаток водных бейцев — продолжительный период высыхания. Поэтому, чтобы получить однородную тональность поверхности, нужно немало времени.

При использовании водных составов древесное волокно приподнимается. Это акцентирует структуру материала, но делает его менее устойчивым к влаге. Чтобы избежать такого эффекта, до пропитывания рекомендуется намочить поверхность древесины, а затем хорошо ошкурить.

к содержанию ↑

Спиртовая основа

Бейцы на основе спирта — это растворы, которые включают этиловый спирт, органические красители и пигменты. Такие составы используются не только для декоративной обработки поверхностей, но и как антисептики. В результате обработки спиртовыми растворами снижается поднятие ворса и не возникает разбухания древесины.

Спиртовые бейцы не позволяют получить равномерно окрашенные поверхности, поскольку такие пропитки быстро сохнут, что приводит к образованию пятен. Таким образом, спиртовые растворы более применимы по отношению к небольшим предметами, тогда как для окрашивания обширных поверхностей это не лучший вариант.

Наносятся спиртовые бейцы исключительно с помощью пульверизаторов. Окрашивание кистью не рекомендуется, так как добиться качественного пропитывания в этом случае сложно.

к содержанию ↑

Масляная основа

Пропитки на основе масел позволяют получить большое разнообразие оттенков. Производятся подобные морилки на базе красителей, которые хорошо растворяются в маслах и олифе. Растворяющим элементом является Уайт-спирит.

Работать с масляным бейцем несложно: он может наноситься как кисточкой, так и из распылителя. Подобные морилки не поднимают древесное волокно и равномерно расходятся по поверхности.

к содержанию ↑

Акриловая основа

Морилки на основе акрила — последнее слово в разработках тонирующих составов. Благодаря акрилу, на поверхности появляется тонкая цветная пленка. Она выполняет не только декоративные, но и защитные функции, ограничивая излишнее увлажнение материала. Акриловые составы быстро сохнут, лишены неприятных запахов, безопасны и могут использоваться для обработки любых видов древесины.

Обрабатывая поверхность акриловым бейцем, нужно не увлекаться большим количеством слоев. Как правило, достаточно пары слоев. Если перестараться, на деревянном изделии останутся пятна.

к содержанию ↑

Восковая основа

Также как и акриловые морилки, восковые пропитки образуют декоративно-защитные пленки. Обычно такие составы применяются вместе с полировкой поверхности. Наносится восковый бейц с помощью мягкой ткани.

Обратите внимание! Восковые бейцы не следует применять, если планируется обработка дерева двухкомпонентными лаками кислотного отверждения или полиуретановыми красками.

Народные рецепты производства морилки

Изготовление морилки вполне можно освоить в домашних условиях. Составы могут производиться несколькими способами:

  • из растительного сырья;
  • из чая, кофе или уксуса;
  • из химических составляющих.

Также можно изготовить отбеливающий состав. Более подробно на технологиях производства морилок своими руками остановимся ниже.

к содержанию ↑

Растительные морилки

Ниже приведены рецепты бейцев на основе растений:

  1. Отвар коры лиственницы. Придает дереву красный оттенок. Особенно красиво будет смотреться березовая древесина.
  2. Красноватый оттенок придает и шелуха лука. Таким отваром принято обрабатывать светлые породы дерева.
  3. Из скорлупы грецкого ореха можно получить пропитку, которая придаст дереву коричневый оттенок. Для приготовления пропитки нужно перемолоть скорлупу в порошок. Высушенный порошок проваривается в воде и процеживается через сито. Далее в раствор добавляется сода. Если добавить в раствор бихромат калия, дерево получит красноватый оттенок. Чтобы получить серый оттенок, на уже обработанную поверхность наносится уксусная кислота.
  4. Черной расцветки можно добиться, обработав дерево отваром дубовой и ольховой коры.
  5. Также черный цвет можно получить за счет отвара коры вербы и ольхи.
  6. Равномерный коричневый цвет получается благодаря раствору, в который добавляются равные количества скорлупы грецкого ореха, сережек ольхи, а также дубовой и ивовой коры. Компоненты засыпаются в воду, которая доводится до кипения. После этого добавляется половина чайной ложки соды, и раствор кипятится еще 10 минут.
  7. Коричневатый оттенок придаст изделию отвар ореховых оболочек и коры яблоневого дерева.
  8. Золотистый оттенок древесина приобретет после обработки отваром ягод крушины.

к содержанию ↑

Составы на основе чая, кофе и уксуса

  1. Для производства морилки, которая придаст дереву коричневый цвет, следует смешать молотый кофе с содой.
  2. Придать светлой древесине коричневый цвет можно с помощью заварки чая. Глубина цвета зависит от крепости заварки.
  3. Эффекта «черного дерева» можно добиться, если в емкость с гвоздями налить уксусную кислоту и дать раствору настояться в течение недели в затемненном месте.

к содержанию ↑

Составы на основе химикатов

  1. Дубовая древесина станет коричневой, если пропитать ее гашеной известью. Орех же, помимо коричневого цвета, приобретет слегка зеленоватый оттенок.
  2. Вишневый цвет можно передать древесине, если нанести на нее марганцевый раствор. Для его приготовления нужно 50 граммов марганцовки добавить в литр теплой воды.
  3. Желтого цвета для светлой древесины можно добиться, если обработать ее отваром корня барбариса. В приготовленный отвар нужно засыпать квасцы, а затем вновь довести жидкость до кипящего состояния.
  4. Зеленоватый тон можно получить при смешивании 50 граммов медянки с уксусом. Раствор кипятить в течение 15 минут.
  5. Если смешать волчьи ягоды с купоросом, получится коричневый оттенок. При смешивании этих же ягод с глауберовой солью выйдет алый цвет. В результате смешивания волчьих ягод и соды получается голубая тональность.

к содержанию ↑

Отбеливающие составы

Отбеливающие пропитки применяются в качестве подготовительной меры перед окрашиванием дерева. Некоторые виды древесины получают интересные оттенки в результате отбеливания. К примеру, орех с его фиолетовым оттенком приобретает бледно-розовый или алый цвет. Яблоневая древесина получает цвет слоновой кости.

Рецепты отбеливающих морилок:

  1. Раствор щавелевой кислоты. На 100 граммов воды берется 5 граммов кислоты. Раствор применяется для отбеливания светлой древесины. На темных породах после обработки таким составом останутся пятна неприятного цвета. После отбеливания дерево промывается в растворе, где на 100 граммов воды берется 3 грамма соды и 15 граммов извести.
  2. С помощью 25%-го раствора перекиси водорода можно отбелить практически все породы дерева, за исключением дуба и палисандра. Промывка в данном случае не нужна.

к содержанию ↑

Методы обработки морилкой

Пропитывание морилкой возможно несколькими способами:

  1. Напыление с помощью пульверизатора. Способ хорош равномерным распределением состава по поверхности.
  2. Растирание при помощи тряпочки. Способ оптимален для пористой древесины.
  3. Обработка поверхности валиком. Используется для нанесения на незначительные площади. При работе валиком не возникают разводы, а состав распределяется равномерно.
  4. Нанесение кисточкой. Такой способ применим не для всех видов морилок. Однако древесина при обработке кисточкой получает особенно глубокие оттенки.

к содержанию ↑

Полезные советы мастерам

Ниже будут даны советы, которые позволят добиться лучших результатов при обработке дерева морилкой:

  1. Состав следует наносить в направлении текстуры материала.
  2. Бейц наносится в 2-3 слоя.
  3. Первым слоем наносится совсем немного раствора. Нужно дождаться высыхания поверхности. Затем ее необходимо ошкурить и снять поднявшийся ворс.
  4. Кисточка не должна попадать на уже обработанные участки.
  5. Полировка древесины осуществляется по направлению волокон или наискось.
  6. Значительные по площади поверхности нужно разделить на участки и обрабатывать поочередно.
  7. Новый слой можно наносить лишь после того, как высохнет предыдущий.
  8. Составы на основе воды или растворителя сохнут до 3 часов, а вот масляные — до 3 суток.
  9. Густые масляные бейцы разводят разбавителями красок, а водные составы разводят водой.

к содержанию ↑

Потенциальные проблемы

При неправильной обработке могут возникнуть потеки. Так бывает, когда на поверхность наносится слишком много морилки. В такой ситуации нужно убрать как можно больше лишней морилки. Чтобы это сделать, нужно нанести еще один слой бейца, а затем с помощью тряпочки удалить чрезмерный слой состава. Для удаления высохшей пропитки применяется растворитель. Также можно использовать наждачку или рубанок.

Пятна на древесине могут появиться вследствие неодинаковой плотности материала. На некоторых породах (например, на орехе) пятна не портят внешний вид, однако на хвойной древесине или вишне пятнистость выглядит непривлекательно. Удалить пятна можно только рубанком. Предупредить появление пятен можно, если применять гелеобразные морилки. Такие составы не растекаются по поверхности и впитываются достаточно долго, поэтому образование пятен маловероятно.

Морилки — виды и свойства

Морилка — это очень распространенная пропитка, которой покрывают деревянные поверхности для усиления их защиты от внешних факторов. Помимо этого, морилки выгодно подчеркивают текстуру, придают красивый оттенок или вовсе меняют первоначальный цвет дерева. У них есть и второе название — бейц. Пигменты, содержащиеся в жидкой среде этой пропитки, глубоко проникают в материал, сохраняя при этом характерную древесную текстуру.  В этой статье рассказывается о том, какими бывают морилки и как ими пользоваться.

Морилки способны подчеркнуть красоту дерева

КУПИТЬ МОРИЛКУ ДЛЯ ДЕРЕВА

Отличие от краски

На первый взгляд может показаться, что морилки и краски — это одно и то же. Данное утверждение неверно: у них разный принцип работы. Краска способна создать только пленку на поверхности дерева. Морилка же способна проникнуть в верхние слои дерева, обеспечивая тем самым надежную защиту от мелких вредителей, УФ-излучения, влаги и других воздействий извне. Кроме того, у нее неплохие красящие свойства — так, например, ее вполне можно использовать для окрашивания мебели и деревянных деталей. Существует несколько разновидностей морилок, различающихся по пигментированности и составу. От последнего зависят основные свойства пропитки и ее предназначение. 

Виды морилок

Основа для состава морилки может быть спиртовой, водной, восковой, масляной, а также масляно-восковой. Чтобы понять, какая из них лучше подходит для конкретного случая, необходимо понять главные свойства каждой из основ.

Так, например, морилка на водной основе — это самый распространенный тип. Она может быть в готовом или порошковом виде, а также в форме концентрата. Стоит учитывать, что порошковые морилки обязательно процеживаются после разведения водой. Это нужно для равномерного прокрашивания древесины. Водные морилки достаточно экономно расходуются, имеют привлекательную цену и множество оттенков на выбор, что и помогло им стать такими популярными. Отсутствие резкого запаха и возможность регулировать концентрацию пропитки позволяют использовать ее в помещениях. Для наружных работ морилка на водной основе не подходит. Стоит учитывать, что глубокие слои древесины она не затрагивает, так как предназначена больше для поверхностного морения. Наносить их лучше в несколько слоев. Морилка на водной основе отлично подойдет для тех, кто не имеет большого опыта в окрашивании древесины.

Спиртовые морилки, как и водные, выпускаются как в готовом виде, так и в порошковом или концентрированном. Разводить их нужно спиртом или ацетоном. Несложно догадаться, что такая пропитка имеет резкий запах и лучше подойдет для морения на улице или в хорошо вентилируемых помещениях. Несмотря на то, что морилка на спиртовой основе быстро высыхает, лучше немного подождать перед нанесением следующего слоя. Использовать кисть или валик в таком случае не стоит — высока вероятность возникновения внешних дефектов. Для морения спиртовым составом отлично подойдет краскопульт. Проникает спиртовая морилка глубже, чем водная.

Существует огромный выбор цветов и оттенков


 
Морилки на масляной основе с добавлением колера глубоко проникают в слои древесины и обеспечивают защиту от влаги и насекомых. Они хорошо ложатся на поверхность, не образовывая пятен. Это прекрасный вариант для мебели, пола (например, паркета), использовать ее можно и на улице. Масляные морилки стоят дороже, чем спиртовые или водные, и намного дольше сохнут. Например, при температуре от 20 до 25 градусов время высыхания слоя — около трех часов. Если нужна только легкая тонировка, можно выдержать морилку не более 10 минут, а потом стереть излишки влажной тряпкой вдоль древесных волокон. Для получения насыщенного цвета стоит выждать хотя бы пару часов, а потом нанести повторный слой. 

Восковые морилки появились на рынке не так давно. В отличие от предыдущих аналогов, они не проникают глубоко в слои древесины, зато эффективно защищают от воздействия УФ-излучения, повышенной влажности, насекомых. Образовывая тонкую пленку на поверхности, они придают дереву красивый блеск и оттенок, маскируют мелкие неровности. Таким образом, восковые морилки подойдут для наружных работ, декоративного окрашивания и повышения защитных свойств поверхности. 

Существует также масляно-восковой вид морилок, совмещающий свойства последних двух вариантов. Такие пропитки существенно дороже, чем водные или спиртовые, однако имеют немало преимуществ. Например, они подойдут для морения поверхностей с мелкими неровностями, наружных работ и даже реставрации. Масляно-восковые морилки применяют для повышения влагостойкости дерева. После такой обработки нет необходимости в лакировке. Для легкой тонировки можно использовать колер, которым разводят основной состав. Стоит учитывать, что такие морилки долго сохнут.

Нанесение морилки кистью

Акриловые морилки можно увидеть на рынке в виде эмульсий. Они способны проникнуть глубоко в структуру древесины и тем самым обеспечить ее защиту против плесени, вредных микроорганизмов и насекомых. Акриловые смолы в составе придают пропитке хорошие антисептические свойства. Так как эти морилки нетоксичны и почти не имеют запаха, их можно использовать в помещениях. Обрабатывать ими можно практически любую поверхность. Другой их плюс — большое разнообразие цветов и оттенков. К минусам можно отнести долгую сушку и высокую стоимость, особенно если речь идет о проверенных и надежных производителях.

Морилки в виде геля способны сделать мягкие породы дерева прочнее и устойчивее. Из-за повышенной густоты для их нанесения необходим специальный тампон. Однако такое покрытие получается равномерным, без подтеков и пятен. Гелевые морилки достаточно универсальны, использовать их можно и в помещении, и на улице. Высыхают они достаточно быстро, а оттенок дают насыщенный. Отлично подойдут такие пропитки для полов, мебели, стен. Хорошая гелевая морилка стоит дорого, однако имеет экономный расход.

Морилки можно использовать как внутри помещений, так и снаружи

Как использовать морилку

Прежде чем начать морение, необходимо предварительно подготовить к этому поверхность. Ее стоит тщательно отшлифовать поверхность мелко- или среднезернистой бумагой, которая уберет мелкие неровности. Нанесенное ранее покрытие (например, краска) должно быть полностью убрано, а сама древесина подвергается обезжириванию уайт-спиритом. Для нанесения подойдет губка. При этом хвойные породы необходимо избавить от смол с помощью специальных средств, так как смолы способны существенно ослабить действие морилки. 

Все участки, которые не нуждаются в обработке и окрашивании, покрываются малярным скотчем или пленкой. Скотч отлично подойдет для краев, а пленка для более обширных поверхностей.  Морение больших участков удобнее проводить с разделением на несколько зон.  Не стоит забывать и о цветовой пробе на незаметном участке. Делать это лучше заранее, чтобы оценить оттенок. Если планируется лишь легкая тонировка, хватит одного или двух слоев. Для усиления тона их понадобится больше. При этом торцы активнее впитывают морилку, поэтому для них придется увеличить расход. Наносить ее необходимо по направлению древесных волокон. 

Когда средство полностью высохнет, поверхность обрабатывается куском грубой ткани. Проводить ею лучше либо по диагонали, либо так же, как и при нанесении морилки, — вдоль волокон.

Чем наносить морилку на дерево

Самые распространенные методы нанесения морилки: 

Кисть. Это самый распространенный способ нанесения, наиболее подходящий для восковых, масляных или водных морилок. При этом натуральный ворс лучше подойдет для первых двух вариантов, а вот для водной основы лучше использовать синтетику. Кисть для окрашивания должна быть качественной и удобной. Ею не стоит наносить спиртовые и гелевые составы. Не стоит набирать на нее слишком много морилки. 

Морилку можно наносить качественной кистью

Валик. Благодаря универсальности и удобству валик также часто применяется для морения. Он позволяет равномерно прокрасить плоскую поверхность без лишнего расхода. Чтобы не допустить избытка морилки на валике, желательно использовать специальную ванночку.

Валиком удобно прокрашивать большие участки

Краскопульт. Отличный вариант для спиртовых морилок и неровных поверхностей. Для его использования потребуется некоторая сноровка, а расход морилки будет больше, чем при выборе валика или кисти.

Краскопульт при морении требует некоторой сноровки

Растирание. После нанесения на поверхность морилка быстро растирается либо губкой из поролона, либо тряпкой. Этот метод отлично подходит для пористых пород дерева. 

Окунание/облив. Такой способ подходит для труднодоступных участков и деталей. Он эффективен для водных и не слишком вязких морилок. Так можно неплохо сократить расход и получить ровное окрашивание. 

Тампон. Тампонирование используется для акриловых и восковых морилок. В качестве альтернативы тампону можно использовать поролоновую губку. Главное, чтобы материал, выбранный для размазывания морилки по поверхности, не оставлял после себя волокон. 

Таким образом, морилка — это достаточно универсальное и полезное средство для деревянных поверхностей. Она способна продлить срок их эксплуатации, а также улучшить внешние и защитные свойства. В нашем интернет-магазине представлен большой выбор морилок разных оттенков для качественного окрашивания и обработки.

Желаем вам удачных покупок!

Ваш Кузьмич.

Морилка для дерева, виды, приготовление морилки своими руками, цвета морилки

Содержание статьи
  • Виды морилок
    • На водной основе
    • На спиртовой основе
    • На масляной основе
    • На акриловой основе
    • На восковой основе
  • Морилка своими руками
  • Нанесение морилки
  • Цвета морилок
  • Палитра цветов морилока

Обработка деревянных поверхностей морилкой является эффективным методом обработки, подчеркивающий красоту дерева необходимого цветовым оттенком. По мимо придания красивого оттенка дереву, морилки также проявляют хорошие свойства антисептика, что продлевает срок службы изделий из дерева.

Морилка – красящей состав, как правило, растворимый в воде, применяемый для окрашивания поверхностей изделий из дерева. Еще одно наименование морилок – бейц.

Состав морилок разработан таким образом, что при обработке поверхности, вещество не пропитывает структуру древесины, а просто придает ей другой цвет.

Морилка находит применение для скрытия натуральной окраски древесины. Также для придания поверхностям более нового вида.

Виды морилок для дерева

Все морилки по основному материалу, применяемому для их изготовления, разделяются на 3 категории:

  1. Морилка для дерева на водной основе

    Основа морилки – вода. Продукт производится в нескольких разновидностях: готовое состояние к использованию, а также в виде порошка, который необходимо растворить в воде. Данная разновидность является наиболее распространенной и позволяет окрашивать поверхности в любые цветовые оттенки, большей степени оттенки дерева. Недостатком морилок на водной основе заключается в том, что при нанесении материал поднимает волокна дерева. Данный факт подчеркивает структуру дерева, но в тоже время вспученные волокна отлично впитывают в себя влагу. Чтобы не было такого явления необходимо перед нанесением морилки смочить водой дерево, выдержав некоторое время в воде. Далее изделие натирается абразивным материалом и последним шагом наносится морилка. Преимуществом морилок на водной основе является отсутствие у них каких-либо запахов, что не наносит вреда здоровью человека;

  2. Морилка для дерева на спиртовой основе

    Основной компонент морилки – спирт. В этом варианте морилка представляет из себя раствор красящего вещества анилина в денатурате. Описываемая разновидность производится также, как и морилка с основой из воды, в двух вариантах – готовый продукт к употреблению и в виде порошка. Минусом этой разновидности морилок является их быстрое высыхание, являющееся причиной появления пятен. Нанесение такого материала ручными способами предоставляет затруднения из-за неравномерности цветового окраса полученного покрытия. Наилучший результат будет наблюдать при применении краскопультов;

  3. Морилка для дерева на масляной основе

    Основа морилки – масло. Данная основа позволяет придать обрабатываемому объекту любой из имеющихся цветовых оттенков дерева. Это становится возможным благодаря смешиванию красителей, которые растворяются в маслах. Для приготовления морилок к употреблению их необходимо разбавлять уайт – спиритом. Эта разновидность не представляет затруднений при их нанесении. Обработанная поверхность быстро высыхает, покрытие наносится равномерно, не вспучивая волокна дерева.

Также имеются морилки на основе акрила и воска. Эти виды разработаны таким образом, что они не имеют недостатков, которые описаны у выше перечисленных разновидностей: не вспучивают волокна древесины, не оставляют пятен, а наносимое покрытие предохраняет дерево от влажности. При разливании воды на поверхности, обработанные акриловыми и восковыми морилками, наблюдается разлет капель воды.

Морилка для дерева акриловая

Морилки на акриловой основе не имеют специфических запахов, а также огнеупорны. При их нанесении необходимо не «перебрать» с толщиной наносимого покрытия

Морилка для дерева восковая

Восковые морилки придают поверхностям яркость, а наносятся на поверхность при помощи гибки или негрубой ткани втиранием, прикладывая небольшое усилие.

Но по мимо того, что эти разновидности защищают поверхности, они также сами нуждаются в защитной обработке. В качестве защитного покрытия для морилок применяют лаки по дереву. Только морилки на основе акрила и воска обладают различными цветовыми окрасами, идеально выделяя структуру деревянной поверхности. По этой причине обе разновидности носят название рустиковые.

Морилка для дерева своими руками

Самостоятельно приготовленные морилки в большей мере преображают деревянные поверхности. Хорошо выглядит крепкий навар листвиничной коры, несущий красный оттенок.

Разнообразные цветовые окраски получаются при отваре мелко измельченной скорлупы грецкого ореха. Далее в раствор через мелкое сито добавляется пищевая сода. Дерево, покрытое подобным составом, имеет коричневый цвет. Для придания красноватого оттенка, после высыхания поверхности ее можно обработать раствором бихромата калия.

Серые тона дереву, обработанному раствором из ореховой скорлупы. Можно придать натиранием разбавленным раствором уксусной кислоты.

Ольховая кора, а точнее ее отвар, придают обрабатываемым объектам глубоко темные окрасы. Равномерный оттенок коричневого цвета получаются при соединении равномерных количеств дубовой коры, ивовой и скорлупы грецких орехов. Все составляющие заправляются водой и доводятся до кипения. Следующим этапом добавить 0,5 чайной ложки пищевой соды и варить еще в продолжительности 10 минут.

Кофе придает дереву необычный цвет. Разнообразные оттенки коричневого определяются количеством добавленного кофе. Кофе заваривают с добавлением соды и раствор наносят горячим.

Имеется также классификация морилок по мере предназначения: для обработки поверхностей внутри помещений, а также для наружной обработки. Морилки для наружных работ содержат специальное вещество, не позволяющее ей выцветать при воздействии лучей ультра – фиолета.

Нанесение морилки на дерево

При выборе инструмента нанесения морилки необходимо уделить внимание ниже представленным факторам:

  1. От размера площади обрабатываемого объекта может применяться обыкновенная кисть, тампон из поролона, а также пневматические распылители. Особых показаний по применению предмета для нанесения не имеется. Но при использовании морилок на нитро основе, имеющих свойство быстро высыхать, применение кистей и тампонов сопровождается появлением пятен, в связи с чем лучше использовать распылители, не обращая внимание на площади обрабатываемых поверхностей. Остальные разновидности морилок наносятся при помощи любого инструмента, обращая внимание только на площадь поверхности;
  2. Для достижения насыщенного окраса поверхности обработку поверхности проводить в несколько слоев. Следующий слой в обязательном порядке должен наносится после полного высыхания предыдущего. Необходимо также полное высыхание перед нанесением финишного слоя морилки или лака.

Цвета морилок для дерева

Немногим известен тот факт, что одну поверхность можно обрабатывать морилками различных цветов. Данный метод применяется для подчеркивания структуры дерева, а также для придания эффекта старины. Цветовые окрасы «белый дуб» и «дуб Арктик» воспроизводятся при смешении двух разновидностях морилок.

В первую очередь применяют отбеливатель древесного покрытия (белого цвета морилка, основной компонент которой – вода), далее, после высыхания этого слоя все дефекты в древесине наполняются морилкой на основе масла, содержащей твердый воск. Воск, попадая в эти поры, забивает их и придает серый или черный оттенок, зависящий от выбранного цвета масла. Внимание привлекает тот факт, оставшаяся отбеленная часть обладает неизменным цветом, даже при обработке тонким защитным пленочным восковым или масляным покрытием.

При соединении разнообразных видов и цветовых окрасок морилок возможно получить необычные эффекты. Суть заключается в том, что в первую очередь наносится общий слой поверхности, а далее уже наносятся заключительные штрихи при нанесении морилок других цветов. Нельзя делать в обратном порядке, так как обработанная деревянная поверхность масло уже не может принимать в себя морилку. Также не стоит забывать о финишном этапе отделки – покрытие лаком.

Палитра цветов морилок для дерева

Никому не представляет секрета то, что количество слоев морилки определяет итоговую окраску дерева. Выбрать подходящий оттенок цвета можно определиться только после проведения пробной окраски.

В первую очередь деревянный «огрызок» необходимо отшлифовать и зачистить. Далее наносится первый слой морилки. Необходимо дождаться его полного высыхания, после чего наносится второй слой, но не на всю длину доски, а на определенную ее часть. Третий слой также наносится уже на меньшую часть от второго слоя. После окончательного высыхания всех слоев морилки имеется возможность определить с нужным цветом обрабатываемого покрытия.

Необходимо обращать внимание на то, что лиственные породы древесины впитывают в себя различные составы морилок, а хвойные разновидности, из-за наличия немалого количества смол, обладают наименьшей впитываемостью.

Значение, назначение и компоненты| Микроорганизмы

РЕКЛАМА:

В этой статье мы обсудим: 1. Значение пятен 2. Цель окрашивания 3. Структурные компоненты 4. Классификация.

Значение пятен:

Пятно – это любое красящее органическое соединение, которое при соединении с другим веществом придает цвет этому веществу. Термины «красители» и «пятна» часто используются биологами как синонимы, но это не одно и то же. Термин «краситель» используется для обозначения красящего вещества, которое используется для общих целей, тогда как термин «пятно» используется для обозначения того красителя, который используется в биологических целях.

Большинство используемых красителей, особенно для бактерий, представляют собой анилиновые красители, названные так потому, что они произошли от анилина (C 6 H 5 NH 2 ). Наиболее часто используемые анилиновые красители — кристаллический фиолетовый, метиленовый синий, основной фуксин, сафранин, эозин и др.

Цель окрашивания :

РЕКЛАМА:

Окрашивание выполняется для любой или всех из следующих трех целей:

(а) Чтобы лучше видеть организм:

Окраска

позволяет лучше рассмотреть организм на контрасте с фоном.

(b) Чтобы отличить один организм от другого:

РЕКЛАМА:

Некоторые микроорганизмы окрашиваются в данных условиях окрашивания, некоторые нет. Такие различия особенно очевидны в процедурах окрашивания, которые поэтому называются «дифференциальными окрашиваниями», причем наиболее распространенными дифференциальными окрашиваниями являются окрашивание по Граму и кислотоустойчивое окрашивание [9].0003

(c) Для определения конкретных конструкций:

Существуют специальные красители, которые реагируют только с определенными структурами организма, например, со спорами, клеточной оболочкой, ядрами и др. Вот почему организм, окрашенный красителем клеточной стенки, показывает только наличие или отсутствие клеточной стенки.

Структурные компоненты (природа) пятен :

Пятна (красители) обычно имеют сложную молекулярную структуру и в основном являются производными бензола. Краситель состоит из трех компонентов: органического соединения, содержащего бензольное кольцо, хромофора и ауксохрома. Таким образом, пятно (рис. 17.1) может быть химически определено как органическое соединение, содержащее как хромофорные, так и ауксохромные группы, связанные с его бензольным кольцом.

Способность красителя связывать макромолекулярные клеточные компоненты, такие как белки или нуклеиновые кислоты, зависит от электрического заряда хромогенной части, а также от окрашиваемого клеточного компонента.

Для удобства, когда бензол органического бесцветного растворителя связывается с нитрогруппой хромофора, это приводит к соединению желтого цвета, называемому тринитробензолом, в котором три атома водорода в молекуле бензола заменены тремя нитрогруппами.

Тринитробензол является хромогеном, но не красителем. Однако если другой атом водорода заменить ауксохромной группой, такой как ОН, образуется соединение, известное как пикриновая кислота (тринитрогидроксибензол). Пикриновая кислота способна к ионизации или электролитической диссоциации с образованием соли, которая связывается с противоположно заряженным биологическим веществом (рис. 17.2).

Таким образом, пикриновая кислота желтого цвета является пятном (красителем). Цвет пикриновой кислоты обусловлен хромофорной нитрогруппой (NO 2 ), а его способность к окрашиванию обусловлена ​​ауксохромной гидроксильной группой (ОН), которая придает молекуле свойство ионизации или электролитической диссоциации.

Хромофор и ауксохром :

Хромофор (греч. chroma = цвет; phoros = нести) представляет собой такую ​​группу с кратной связью, которая связана с соединением и придает цвет этому соединению. Отто Н. Витт (1876 г.) первым обозначил хромофор. Хромофорсодержащая молекула называется хромогеном.

Наиболее эффективными хромофорами являются нитрозо (NO), нитро (NO 2 ), азо (N = N), п -Хиноид, о-Хиноид и др. Химическая структура хромофора дана на рис. 17.3 . Присутствия любого из хромофоров в молекуле обычно достаточно для получения цвета. Так, нитробензол — бледно-зеленый, азобензол — оранжево-красный, р —хиноны — желтые, о-хиноны — оранжевые или красные.

Ауксохромы (греч. auxein = увеличивать, chroma = цвет) представляют собой группы, которые сами по себе не производят цвет, но способны усиливать цвет, когда присутствуют в молекуле вместе с хромофором. Наиболее эффективными ауксохромами являются: -OH, NH 2 , —NHR. —NR 2 , CI и CO 2 H.

РЕКЛАМА:

Морилка и ее функция :

Морилка

— это вещество, которое образует нерастворимое соединение с красителем и помогает закрепить цвет на компонентах клетки. Некоторые красители никогда не окрашивают клетки или их компоненты, если не обработаны морилкой. Протрава прикрепляется к клетке или ее компонентам, а затем соединяется с красителем, образуя нерастворимый цветной комплекс. Этот комплекс называется озером.

Обычно используемые морилки представляют собой оксиды алюминия, железа и хрома. Ализарин является примером красителя, который придает цвет только в сочетании с морилкой. Он дает разные цвета при использовании с разными мордентами. Он дает красный цвет с солями алюминия и олова, коричневато-красный цвет с хромовой протравой и черно-фиолетовый с железной протравой.

Классификация (типы) пятен :

Пятна (красители) можно классифицировать различными способами на основе их происхождения, цели использования, окрашивающей активности и заряда на их поверхности.

Различные классификации пятен:

1. Классификация по происхождению:

По происхождению пятна можно разделить на натуральные и синтетические.

РЕКЛАМА:

(i) Натуральные красители:

Эти красители получают из природных ресурсов непосредственно как натуральные продукты. Хорошими примерами являются гематоксилин и кармин. Гематоксилин получают из сердцевины дерева (Haematoxylon campechianum), тогда как кармин получают из кошенильной самки насекомого. Натуральные красители используются в основном для гистологических целей.

(ii) Синтетические красители:

Синтетические красители получают искусственно, в основном путем фракционирования и рекомбинации продуктов каменноугольной смолы, поэтому их обычно называют красителями каменноугольной смолы. Последние используются в основном для приготовления бактериальных красителей. Важными синтетическими красителями являются сафранин, устойчивый зеленый, амилиновый синий, метиленовый синий, кристаллический фиолетовый, эозин, кислый фуксин, оранжевый-G и т. д.

.

2. Классификация по назначению:

Пятна можно разделить на категории в зависимости от цели их использования.

РЕКЛАМА:

(i) Прямые или обычные пятна:

Анилиновые красители способны непосредственно окрашивать бактерии. Исключение составляют бактериальные споры, например, Bacillus spp. и бактерии с восковым налетом на клеточной стенке, например, Mycobacterium spp.

(ii) Косвенное окрашивание:

Это красители, окрашивающие только фон, например, нигрозин или тушь, применяемые либо для наблюдения слизистых оболочек обволакивающих бактерий (капсул), либо некоторых спор грибов или клеток одноклеточных животных.

(iii) Селективные красители:

Эти красители используются для специальных целей, для окрашивания отдельных частей организма, таких как споры, гранулы метахроматина, жгутики, ядра и т. д.

РЕКЛАМА:

(iv) Дифференциальные красители:

Эти красители позволяют различать в смеси две разные группы бактерий, например, грамположительные и грамотрицательные.

3. Классификация на основе активности окрашивания:

На основе активности окрашивания красители можно разделить на ядерные, цитоплазматические и гистологические.

(i) Ядерные пятна:

Ядерные красители имеют кислую природу и окрашивают только материалы хроматина. Примерами являются кармин, гематоксилин и т. д.

(ii) Окрашивание цитоплазмы:

Эти красители носят основной характер и окрашивают цитоплазму и ее включения. Примерами являются быстрый зеленый, анилиновый синий, эритрозин, эозин, оранжевый-G и т. д.

(iii) Гистологическое окрашивание:

Гистологические красители — это те, которые специфически окрашивают определенные ткани в срезах. Сафранин окрашивает одревесневшие и опробковевшие клеточные стенки.

4. Классификация по тарифу:

В зависимости от заряда, которым обладают молекулы красителя (красителя), они подразделяются на кислотные, основные и нейтральные.

(i) Кислотные пятна (красители):

Кислотные красители (красители) имеют кислотную природу, поскольку при ионизации они приобретают отрицательный (анионный) заряд на своей поверхности. Кислотный фуксин, эозин и пикриновая кислота являются примерами.

(ii) Основные красители (красители):

Основные красители (красители) являются основными по своей природе, потому что они обладают положительным (катионным) зарядом на своей поверхности при ионизации. Примерами являются стойкий зеленый, анилиновый синий, метиленовый синий, кристаллический фиолетовый, сафранин и т. д.

(iii) Нейтральные красители (красители):

Нейтральные красители (красители) образуются при сочетании кислотных и основных красителей в водной форме. Красящее вещество в нейтральных красителях присутствует как в анионной, так и в катионной группах. Поэтому эти красители не являются ни кислотными, ни основными. Например, нейтральный красный.

Кислотные и основные красители (красители) :

Все красители (красители), используемые для окрашивания бактерий, являются синтетическими продуктами, поскольку они производятся искусственно, в основном путем фракционирования и рекомбинации каменноугольной смолы (анилина), и поэтому обычно называются каменноугольными красителями или анилиновыми красителями. Хотя синтетические красители (красители) сильно различаются по своей химической природе и окрашивающим свойствам, для практических целей их часто делят на кислотные (красители) и основные красители (красители).

1. Кислотные красители (красители):

Кислотные красители (красители) являются анионными (отрицательными) и ионизируются, придавая отрицательный заряд хромогенной части. Таким образом, кислотный краситель (краситель) имеет сильное сродство к катионным (положительным) составляющим клетки.

Эти красители (красители) используются для окрашивания компонентов цитоплазмы, поскольку белки, положительно заряженные компоненты цитоплазмы, легко связываются и принимают цвет отрицательно заряженного хромогена этих красителей. Кислотный фуксин, эозин, пикриновая кислота и т. д. являются примерами. Пикриновая кислота, например, образует анионный хромоген при ионизации, как показано.

2. Основные красители (красители):

Основные красители (красители) являются катионными (позитивными) и ионизируют, обеспечивая положительный заряд хромогенной части. Таким образом, основной краситель (краситель) имеет сильное сродство к анионным (отрицательным) компонентам клетки.

Эти красители (красители) используются для окрашивания отрицательно заряженных клеточных компонентов (например, нуклеиновых кислот), поскольку они легко связываются и принимают цвет положительно заряженного катионного хромогена основного красителя. Основными красителями являются метиленовый синий, кристаллический фиолетовый, сафранин и др. Метиленовый синий на самом деле является солью (хлорид метиленового синего) и образует катионный хромоген, как показано на рисунке.

Основные красители (красители) чаще используются для бактериального окрашивания. Наличие отрицательного заряда на бактериальной поверхности отталкивает большинство кислых пятен и, таким образом, препятствует их проникновению в бактериальную клетку.

3. Соли кислотных и основных красителей (красители):

Использование терминов «кислотные» и «основные» красители (красители) не означает, что рассматриваемые красители являются свободными кислотами или свободными основаниями. Свободные цветные кислоты и основания часто нерастворимы в воде и редко обладают заметным окрашивающим действием, т. е. краски не «прилипают». Соли этих соединений, с другой стороны, более растворимы, лучше проникают и окрашиваются надолго, и они являются настоящими пятнами.

Кислотное пятно — это соль цветной кислоты, тогда как основное пятно — это соль красящего основания. Другими словами, кислотные красители обязаны своим окрашиванием аниону, а основные красители — катиону. Однако важные соли кислотных и основных красителей показаны на рис. 17.4.

Stains — Microbiology Resource Center

Соображения безопасности

Будьте осторожны с аэрозолями при переносе бактерий из петли на предметное стекло. Петля очень гибкая, и ее легко отключить от петли, полной организмов. Не думайте, что ваш организм мертв. Фиксация тепла или метанола не гарантирует уничтожения организма. Выбрасывайте заполненные предметные стекла в ведро с дезинфицирующим средством на рабочем месте.

Общие соображения

Вы стремитесь получить легкую суспензию клеток, которая оставит на предметном стекле слабое мутное пятно. У вас много места на слайде; используй это! Сначала полезно нарисовать круг в нижней части слайда, чтобы вы знали, где искать мазок. Очень легко запутаться, на какой стороне слайда находится ваш мазок. Обязательно пометьте дальний край слайда. Делайте это постоянно на одном и том же конце слайда, чтобы сориентировать слайд.

Наберитесь терпения и дайте предметному стеклу высохнуть на воздухе, прежде чем приклеивать его к предметному стеклу. Если предметное стекло будет влажным и вы зафиксируете его нагреванием, бактерии закипят, и клеточная морфология будет потеряна. Если ваше предметное стекло мокрое и зафиксируйте его в метаноле, оно, скорее всего, смоется. Слишком толстые мазки, скорее всего, смоются с предметного стекла независимо от метода фиксации.

Мазок из бульона

С бульонными культурами обычно легче работать, поскольку клетки уже разведены в бульоне. Обязательно тщательно перемешайте культуральную пробирку, чтобы суспендировать бактерии в бульоне.

  1. Назовите слайд. Асептически перенесите полную петлю организма в центр предметного стекла.
  2. Используйте плоскую часть петли, чтобы размазать каплю бульона вокруг предметного стекла. Используйте спиралевидные круговые движения, чтобы распределить каплю. Поскольку бульон полон белка, мазок обычно остается расплывчатым и не образует комочков на поверхности предметного стекла.
  3. Отложите предметное стекло для просушки на воздухе. Это займет как минимум несколько минут. Не торопитесь с этим шагом.
Мазок с чашки

Петлей можно удалить много микроорганизмов. Вы можете использовать иглу для прививки, чтобы перенести свой организм на предметное стекло. Обязательно используйте стерильную воду для разбавления образцов. Обычная водопроводная вода или деионизированная вода в бутылках для ополаскивания часто заражены бактериями.

  1. Назовите слайд. Асептически перенесите петлю со стерильной водой в центр предметного стекла.
    • Это служит как для разбавления ваших бактерий, так и для распространения.
  2. Выберите хорошо изолированную колонию.
  3. Проколоть стерильной иглой или слегка зачерпнуть край колонии стерильной петлей.
  4. Поместите иглу/петлю в центр капли и круговыми движениями по спирали распределите бактерии по предметному стеклу.
  5. Отложите предметное стекло для просушки на воздухе. Это займет как минимум несколько минут. Не торопитесь с этим шагом.
Фиксация

Процедура фиксации одинакова независимо от источника мазка, планшета или бульона. Существует два метода прикрепления бактерий к предметному стеклу: термофиксация или фиксация метанолом. Термофиксация используется только с организмами BSL1. Организмы, с которыми мы будем работать, относятся к BSL2, поэтому вам нужно будет использовать метод фиксации метанола. Тепловая фиксация предметного стекла может привести к образованию аэрозолей, и с организмами BSL2 мы должны максимально предотвратить это. Фиксация метанола вызывает меньше изменений в клеточной морфологии и не создает аэрозолей.

Пожалуйста, будьте осторожны при работе с метанолом, если вы забудете, что зафиксировали его метанолом, и ваше предметное стекло не полностью высохнет, оставшийся метанол загорится.

Фиксатор метанола (BSL2)
  1. Убедитесь, что предметное стекло абсолютно сухое. Установите его на стойку для окрашивания над раковиной.
  2. Осторожно залейте предметное стекло 95% метанолом. Дайте постоять две минуты.
  3. Наклоните предметное стекло и слейте метанол.
    • Прикоснитесь краем предметного стекла к бумажному полотенцу, чтобы убрать лишний метанол.
  4. Перед окрашиванием отложите предметное стекло для просушки на воздухе.

Простое окрашивание

Простое окрашивание

Простое окрашивание — это просто: добавьте один краситель на фиксированное предметное стекло, дайте ему впитаться, смойте, дайте высохнуть и посмотрите. Это быстрая процедура для определения наличия и морфологии бактерий в клинических образцах, таких как стул и выделения.

Метиленовый синий используется для определения морфологии веретенообразных и спирохет при инфекциях полости рта. Это также краситель выбора для идентификации метахроматических гранул в Коринебактерии дифтерии . Гранулы будут окрашиваться в более глубокий синий цвет, чем окружающие синие бактерии. Другие виды Corynebacterium не имеют метахроматических гранул. Подойдут любые основные красители, такие как метиленовый синий, кристаллический фиолетовый, малахитовый зеленый или сафранин.

Основные (катионные или положительно заряженные) красители связываются с отрицательно заряженными компонентами клеточной мембраны и цитоплазмы.

Материалы
  • Метиленовый синий
  • Сафранин
  • Кристаллический фиолетовый
  • Малахитовый зеленый
  • Стойки для окрашивания
  • Ящики для микроинструментов
  • Готовые предметные стекла
Общие положения

Окрашивание — это и искусство, и наука. Не существует жестких и быстрых правил для окрашивания и времени полоскания. Перечисленное время является рекомендациями, которые обычно работают хорошо. Вам нужно будет поэкспериментировать с тем, что работает с имеющимися у вас бактериями, и с методами, которые вы используете.

Очень важно, чтобы вы точно записывали, что вы делаете, и результаты, которые вы наблюдаете, в лабораторном журнале. Вы будете повторять эти окрашивания позже в семестре, и вы не хотите тратить свое время на повторное изобретение вашей успешной процедуры окрашивания. Было бы полезно, если бы каждый сотрудник лабораторного стола выбрал разные пятна, чтобы вы могли видеть, как они все выглядят.

Простая процедура окрашивания
  1. Поместите тщательно подготовленные фиксированные предметные стекла на подставку для окрашивания над раковиной.
    • Делайте слайды по одному.
    • Покройте мазок любым доступным вам основным красителем.
    • Вам нужно ровно столько красителя, чтобы покрыть мазок. Пятно не должно капать с предметного стекла.
  2. Оставьте пятно на 1-5 минут.
  3. Используя прищепку, возьмитесь за длинный конец горки, наклоните горку над раковиной и смойте пятно струей воды из промывочной бутылки.
    • Распылите средство над мазком и дайте ему стечь.
    • Если вы распыляете непосредственно на мазок, вы можете смыть мазок с предметного стекла.
    • Промывать до тех пор, пока вода не станет прозрачной или слегка окрашенной.
  4. Прикоснитесь краем предметного стекла к бумажному полотенцу, чтобы удалить лишнюю воду. Теперь вы можете дать ему высохнуть на воздухе. В качестве альтернативы вы можете высушить его промокательной бумагой, поместив ее в книгу для промокательной бумаги и слегка нажав. Хотя этот метод быстрее, вы также можете промокнуть плохо прилипший мазок.
  5. Просмотрите предметное стекло при иммерсии в масло и запишите свои наблюдения в журнал лабораторных работ.
  6. Выбросьте использованные окрашенные предметные стекла в ведро с дезинфицирующим средством в раковине.

Негативное окрашивание

Негативное окрашивание

Негативное окрашивание еще проще, чем простые окрашивания, поскольку вам не нужно делать мазок. Каплю клеток наносят на предметное стекло и просматривают без фиксации. Пятно представляет собой взвесь углерода, обнаруженного в туши или нигрозине. Частицы углерода заряжены отрицательно, как и клеточная мембрана. Фон выглядит черным или окрашенным в цвет сепия, а клетки остаются прозрачными, так как они отталкивают краситель.

Некоторые положительно заряженные включения, такие как сера, могут окрашиваться. Это окрашивание дает точную информацию о морфологии клеток и наличии капсулы, поскольку клетки не фиксируются. Размер клеток кажется немного больше, потому что любые внеклеточные покрытия или выделения снаружи клеточной мембраны также не окрашиваются. Отрицательное окрашивание полезно для быстрого определения присутствия Cryptococcus neformans , возбудителя криптококкоза, в спинномозговой жидкости. Этот метод также используется при окрашивании эндоспор и капсул.

Материалы
  • Краситель нигрозин
  • Ассорти культур
Общие положения

Как и при приготовлении мазка, вам потребуется лишь небольшое количество микроорганизма. Если у вас слишком много организмов, вы не сможете увидеть морфологию отдельных клеток. Также важно не использовать слишком много нигрозина. Если он слишком толстый, фон будет иметь потрескавшийся вид, похожий на лужи грязи, высыхающие на солнце. Вы хотите получить светлую пленку. Ваш инструктор продемонстрирует вам эту технику.

Процедура негативного окрашивания
  1. Промаркируйте предметное стекло. Если вы работаете с бульонной культурой, поместите петлю, полную организмов, примерно на три четверти пути с левой стороны предметного стекла. Если вы работаете с чашечной культурой, добавьте каплю стерильной воды на предметное стекло и разведите свой микроорганизм в капле, не размазывая каплю.
  2. Нанесите одну или две капли нигрозина на другое предметное стекло. Используйте свою стерилизованную петлю, чтобы собрать петлю, полную нигрозина. Аккуратно смешайте его с каплей клеток, не слишком сильно размазывая каплю.

  1. Держите правый конец ползуна правой рукой; левой рукой сделайте еще один слайд под углом 45° или меньше к первому слайду, сразу за каплей нигрозина/клеток.
  2. Скользите наклонным предметным стеклом назад по поверхности первого предметного стекла до тех пор, пока оно просто не коснется капли нигрозина и клеток. Подождите, пока капиллярное действие не потянет жидкость вдоль передней кромки наклонного предметного стекла.
  3. Протолкните угловой слайд по поверхности плоского слайда. Большая часть нигрозина должна оставаться на исходном месте. Выбросьте предметное стекло в ведро с дезинфицирующим средством.
  4. Отложите окрашенное предметное стекло, чтобы оно высохло на воздухе, прежде чем исследовать его в иммерсионном масле. Не забудьте начать изучение вашего слайда в области с самым бледным серым фоном.
  5. Запишите свои наблюдения в журнал лабораторных работ.
  6. Выбросьте использованное окрашенное предметное стекло в ведро с дезинфицирующим средством.
Специальное примечание

Нигрозин очень легко снимается с предметного стекла и попадает на масляную иммерсионную линзу. Обязательно тщательно очистите масляную линзу, когда закончите. Затем снова очистите. Как только он высохнет на линзе, его будет очень трудно удалить, и это ухудшит вашу способность (и других микро-студентов, использующих этот прицел) четко видеть вне линзы.

Окраска по Граму (отрицательная)

Окраска по Граму

Окраска по Граму является наиболее распространенным дифференциальным окрашиванием, используемым в микробиологии. Дифференциальные пятна используют более одного красителя. Уникальные клеточные компоненты бактерий определяют, как они будут реагировать на различные красители. Процедура окрашивания по Граму практически не изменилась с тех пор, как она была впервые разработана в 1884 году. Почти все бактерии можно разделить на две группы: грамотрицательные и грамположительные. Некоторые бактерии грамвариабельны. Trichomonas , Strongyloides , некоторые грибы и некоторые цисты простейших также имеют реакцию Грама. Очень маленькие бактерии или бактерии без клеточной стенки, такие как Treponema , Mycoplasma , Chlamydia или Rickettsia , не имеют реакции Грама. Характеристика любых новых бактерий должна включать их реакцию Грама.

Обычно дифференциальное окрашивание состоит из четырех компонентов; первичное пятно, протрава, фиксирующая пятно, обесцвечивающий агент для удаления основного пятна и встречное пятно. При окраске по Граму основной окраской является кристаллический фиолетовый. Это придает клетке интенсивный фиолетовый цвет. Морилка, йод, образует комплекс с кристаллическим фиолетовым внутри клеточной стенки. Затем клетку промывают либо обесцвечивателем Грама, либо 95% этанол. Грамположительные клетки сохранят красящий комплекс и останутся фиолетовыми. Краситель вымывается из грамотрицательных клеток. Встречный краситель, сафранин, используется для окрашивания клеток, которые потеряли первичное окрашивание, иначе они остались бы бесцветными, и вы не смогли бы их увидеть.

Большой комплекс йод-кристаллический фиолетовый сохраняется в клеточных стенках грамположительных клеток из-за молекулярной структуры многих слоев пептидогликана в клеточной стенке. Существует много сшитых тейхоевых кислот, и комплекс йода с красителем физически не может выйти наружу. В мембране также меньше липидов, и обесцвечивающий агент также не может добраться до нее. Грамотрицательные клетки имеют внешнюю мембрану и только один слой пептидогликана с большим количеством липидов. Краситель кристаллический фиолетовый легко вымывается.

Общие положения

Точность окрашивания по Граму зависит от целостности клеточной стенки бактерий. Есть множество вещей, которые могут влиять на целостность клеточной стенки; старые клетки (т. е. культуры старше 24 часов), образец получен от кого-то, кто лечился антибиотиками, нацеленными на эту клеточную стенку, такими как пенициллин, с клетками грубо обращались или вы их исправили при нагревании. В этих условиях грамположительные клетки становятся грамотрицательными. Если обесцвечивать слишком долго, грамположительные клетки будут выглядеть как грамотрицательные. И наоборот, если вы недостаточно обесцвечиваете, грамотрицательные клетки будут выглядеть как грамположительные. Единственный способ, которым вы можете доверять своим результатам, — это всегда запускать известные грамположительные и известные грамотрицательные образцы на одном и том же предметном стекле. Если они окрашиваются, как предсказано, вы можете быть уверены, что результат вашего неизвестного образца надежен.

Для правильного окрашивания по Граму требуется практика. Не рассчитывайте получить хорошее окрашивание по Граму с первой попытки. Рекомендуется придерживать предметное стекло прищепкой; ваши перчатки станут довольно психоделическими, как и все, к чему вы прикоснетесь!

Процедура окрашивания по Граму
  1. Промаркируйте предметное стекло. Подготовьте свои мазки на предметном стекле с отрицательным граммом слева, вашим неизвестным в середине и положительным граммом справа.
    • Не забудьте смазать предметное стекло метанолом!
  2. Положив предметное стекло на штатив для окрашивания, покройте мазки кристаллическим фиолетовым на 1 минуту.
    • Используйте столько красителя, чтобы полностью покрыть мазок, но не настолько, чтобы он стекал или капал с предметного стекла.
  3. Наклоните предметное стекло, вылейте кристаллический фиолетовый и быстро промойте водой из промывочной бутылки.
    • Не распыляйте непосредственно на мазки, иначе они смоются.
  4. Залейте предметное стекло йодной протравой на 1 минуту.
  5. Наклоните предметное стекло, слейте излишки йода и осторожно обесцвечивайте с помощью обесцвечивающего средства Грама до тех пор, пока оно не станет прозрачным.
    • Это сложная часть!
  6. Наклоните предметное стекло на несколько бумажных полотенец, чтобы удалить излишки обесцвечивающего средства.
  7. Залейте предметное стекло сафранином на 1 минуту.
  8. Наклоните предметное стекло, чтобы слить излишки сафранина, и осторожно промойте водой, пока она не станет прозрачной.
  9. Дайте предметному стеклу высохнуть на воздухе
  10. Наблюдать при погружении в масло.
    • Грамположительный контроль должен быть фиолетовым, а Грамотрицательный контроль должен быть розовым.
  11. Выбросьте использованный слайд в ведро с дезинфицирующим средством.

Окрашивание капсул (Klebsiella)

Окрашивание капсул красный Конго

Окрашивание капсул красный Конго является модификацией отрицательного окрашивания нигрозином, которое вы, возможно, делали ранее. Бактерии поглощают краситель конго красный, а затем фон окрашивают кислым красителем фуксином. Капсула или слои слизи, сильно гидратированные полимеры, исключают оба красителя. Фон будет синим, бактериальные клетки — розовыми, а прозрачные ореолы — это капсулы.

Клинически капсулы некоторых высокопатогенных бактерий (например, пневмококков, Haemophilis influenzae и менингококков) можно отличить с помощью антисывороток, специфичных для этого типа капсул. Бактерии суспендируют в антисыворотке, а затем смешивают с метиленовым синим. В процедуре окрашивания антисывороткой бактерии будут казаться синими, окруженными прозрачным ореолом, а затем окруженными тонкой синей линией в том месте, где антисыворотка прикрепилась к капсуле.

Материалы
  • Конго красный краситель
  • Кислотный краситель фуксин
  • Кислый спирт
  • Klebsiella pneumoniae культура
  • Enterobacter aerogenes культура
Процедура окрашивания капсул Congo Red
  1. Поместите полную петлю красителя Congo Red на предметное стекло
  2. Смешайте небольшое количество вашего организма с каплей конго красного.
    • Хорошо распределите суспензию организма/красителя на предметном стекле
    3. 903:00 Дайте предметному стеклу полностью высохнуть на воздухе.
    • Метанол не исправить!
  3. Зафиксируйте высохшее предметное стекло кислым спиртом на 15 секунд.
  4. Промыть дистиллированной водой и покрыть предметное стекло кислотным фуксином на 1-5 минут.
  5. Промойте водой и дайте высохнуть на воздухе.
  6. Осмотрите предметное стекло при погружении в масло.
    • Клетки окрашиваются в красный/розовый цвет, а капсулы выглядят как бесцветные ореолы на темно-синем фоне.

Окраска эндоспор Вирца

Образование эндоспор характерно для Clostridum и Bacillus spp. Способность концентрироваться и покрывать свою протоплазму позволяет им выживать в неблагоприятных условиях окружающей среды, с которыми они сталкиваются в своей почвенной среде обитания. Это также позволяет спорам противостоять окрашиванию. «Живые» организмы легко визуализируются с помощью простых окрасок и окрасок по Граму.

Эндоспоры обычно обладают высокой преломляющей способностью, падающий на них свет отклоняется. Много видов Bacillus имеют тельца включения, обладающие высокой преломляющей способностью. Эти тельца включения могут выглядеть как эндоспоры при обычном окрашивании. Присутствие эндоспор должно быть подтверждено окрашиванием, специфичным для эндоспор. Наличие, характерная форма и положение эндоспор требуют специальных процедур для проникновения через оболочку эндоспор. Большинство окрашиваний эндоспор включают нагревание предметных стекол, при этом они постоянно остаются влажными красителем. Хотя он быстрее, он производит летучие химические вещества и представляет собой просто большой беспорядок. Те же результаты можно получить, оставив краситель на предметном стекле на 30 минут. Рекомендуется сначала начать с этого слайда и работать над другим пятном, пока вы ждете, пока краситель проникнет в эндоспору.

Общие соображения

Вы будете использовать видов Bacillus для окрашивания эндоспор. Форма и положение спор B. cereus очень похожи на споры B. anthracis . Bacillus не начинает образовывать споры, пока не закончится пища. Если культуры слишком молодые, вы в основном увидите только розовые палочки бактерий. Если культуры слишком старые, вы в основном увидите только маленькие зеленые овалы эндоспор. В идеале вы должны увидеть зеленые овальные тела эндоспор, окруженные розовой вегетативной бактериальной клеткой. Для достижения наилучших результатов выберите образец из середины колонии с помощью прямой инокуляционной иглы. Край колонии все еще активно растет и будет иметь мало эндоспор.

Материалы
  • Малахитовый зеленый краситель (5%)
  • Сафранин (0,25%) — встречная окраска
  • Bacillus spp. пластина
Процедура окрашивания эндоспор Вирца
  1. Сделайте мазок на Bacillus и метаноловый фиксаж.
  2. Залить мазок малахитовой зеленкой.
  3. Дайте красителю подействовать не менее 30 минут .
    • Добавьте больше морилки, если она начинает высыхать.
  4. Промойте предметное стекло дистиллированной водой.
  5. Залейте предметное стекло сафранином (0,25%) на 1-5 минут.
  6. Промойте предметное стекло дистиллированной водой и дайте высохнуть на воздухе.
  7. Наблюдать при погружении в масло.
    • Эндоспоры цвета морской волны, бактериальные клетки розовые.
Окрашивание по

граммов — StatPearls — NCBI Bookshelf

Nishant Tripathi; Амит Сапра.

Информация об авторе

Последнее обновление: 11 августа 2021 г.

Введение

Окрашивание по Граму — один из наиболее важных методов окрашивания в микробиологии. Он получил свое название от датского бактериолога Ганса Кристиана Грама, который впервые представил его в 1882 году, в основном для выявления организмов, вызывающих пневмонию. Часто первый выполняемый тест, окрашивание по Граму, включает использование кристаллического фиолетового или метиленового синего в качестве основного цвета. Термином для организмов, которые сохраняют основной цвет и кажутся пурпурно-коричневыми под микроскопом, являются грамположительные организмы. Микроорганизмы, которые не поддаются первичной окраске, кажутся красными под микроскопом и являются грамотрицательными микроорганизмами.

 Первым этапом окрашивания по Граму является использование кристаллического фиолетового красителя для первоначального окрашивания предметного стекла. Следующий шаг, также известный как фиксация красителя, включает использование йода для образования комплекса кристаллический фиолетовый-йод, чтобы предотвратить легкое удаление красителя. Впоследствии для удаления красителя используется обесцвечиватель, часто растворитель этанола и ацетона. Основной принцип окрашивания по Граму заключается в способности стенки бактериальной клетки удерживать краситель кристаллический фиолетовый во время обработки растворителем. [3] Грамположительные микроорганизмы имеют более высокое содержание пептидогликана, тогда как грамотрицательные организмы имеют более высокое содержание липидов.[4]

Изначально все бактерии поглощают краситель кристаллический фиолетовый; однако при использовании растворителя липидный слой грамотрицательных организмов растворяется. При растворении липидного слоя грамотрицательные теряют первичную окраску. Напротив, растворитель обезвоживает стенки грамположительных клеток с закрытием пор, предотвращая диффузию комплекса фиолетового с йодом, и, таким образом, бактерии остаются окрашенными. Продолжительность обесцвечивания является критическим этапом окрашивания по Граму, поскольку длительное воздействие обесцвечивающего агента может удалить все пятна от обоих типов бактерий.

Завершающим этапом окрашивания по Граму является окрашивание основным фуксином для придания обесцвеченным грамотрицательным бактериям розового цвета для облегчения идентификации. Он также известен как контрастное окрашивание. Некоторые лаборатории используют сафранин в качестве контрастного красителя; однако основной фуксин окрашивает грамотрицательные микроорганизмы более интенсивно, чем сафранин. Точно так же Hemophilus spp., Legionella app и некоторые анаэробные бактерии плохо окрашиваются сафранином.

Набор образцов

Для окрашивания по Граму можно использовать различные клинические образцы. Некоторыми из обычно используемых образцов являются мокрота, кровь, спинномозговая жидкость, асцитическая жидкость, синовиальная жидкость, плевральная жидкость, моча и т. д. Также можно использовать мазки из ноздрей, горла, прямой кишки, раны, шейки матки и т. д. Сбор образцов всегда должен осуществляться в стерильных контейнерах.

Процедуры

Типы оборудования, необходимого для окрашивания по Граму, включают:

 Реагенты, необходимые для окрашивания по Граму, включают:

  • Кристаллический фиолетовый (основной краситель) [1]

  • Раствор йода по Граму (протрава) [1]

  • Ацетон/этанол (50:50 об. :об.) (обесцвечиватель) 0[1] 0[1] 03

  • 0,1% раствор основного фуксина (контрастное окрашивание) [1]

  • Вода

Процедура

1. Приготовление мазка:

  • Петля для посева используется для переноса капли взвешенной культуры на предметное стекло микроскопа.

  • Если в чашке Петри или в наклонной культуральной пробирке есть колония, добавляется капля или несколько петлей воды, чтобы облегчить перенос минимального количества колонии на предметное стекло.

  • Требуется минимальное количество культуры. Если культуру можно обнаружить визуально на инокуляционной петле, это указывает на сбор слишком большого количества культуры.

  • Культуру наносят инокуляционной петлей до получения ровной тонкой пленки по кругу диаметром 15 мм. Типичное предметное стекло может содержать до 4 небольших мазков при исследовании более чем одной культуры.

  • Предметное стекло можно сушить на воздухе или с помощью тепла над нежным пламенем. Предметное стекло следует перемещать по кругу над пламенем, чтобы предотвратить перегрев или образование кольцевых узоров на предметном стекле. Тепло способствует адгезии клеток к предметному стеклу и предотвращает значительную потерю культуры во время промывания.

2. Окраска по Граму:

  • На фиксированную культуру наносится краситель кристаллический фиолетовый.

  • Через 10–60 секунд краситель смывается, а излишки красителя смываются водой. Цель состоит в том, чтобы смыть пятно без потери фиксированной культуры.

  • Раствор йода покрывает мазок на 10–60 секунд. Этот шаг известен как «фиксация красителя». Раствор йода сливают, предметное стекло промывают проточной водой. Избыток воды с поверхности стряхивается.[7]

  • На предметное стекло добавлено несколько капель обесцвечивающего вещества. Обесцвечиватели часто представляют собой смешанный растворитель этанола и ацетона. Этот этап известен как «обработка растворителем». Предметное стекло промывают водой в течение 5 секунд. Чтобы предотвратить чрезмерное обесцвечивание грамположительных клеток, прекратите добавлять обесцвечивающий агент, как только растворитель перестанет окрашиваться при протекании по предметному стеклу.

  • Мазок докрашивают основным раствором фуксина в течение 40–60 секунд. Раствор фуксина смывают водой, а избыток воды промокают салфеткой. Слайд также можно высушить на воздухе после стряхивания лишней воды.

3. Микроскопия предметного стекла:

  • Предметное стекло следует исследовать под микроскопом в иммерсионном режиме.

  • При первоначальном исследовании слайдов следует использовать объектив X40 для оценки распределения мазка, а затем их следует исследовать с помощью масляного иммерсионного объектива X100.

  • Все участки предметного стекла требуют первоначального осмотра. Области толщиной всего в одну клетку должны быть исследованы. Толстые области на слайдах часто дают переменные и неправильные результаты.

  • Окрашивание лейкоцитов и макрофагов Грамотрицательные.

  • Клетки плоского эпителия окрашиваются грамположительно.

Используются различные модификации окрашивания по Граму, такие как окрашивание по Граму Аткина, окрашивание по Граму Берка и т. д.

Показания

Окрашивание по Граму показано при подозрении на бактериальную инфекцию для легкой и ранней диагностики.

Возможный диагноз

Окрашивание по Граму помогает в диагностике заболевания или патологического состояния.

Примеры грамположительных микроорганизмов:

  • Cocci: Staphylococcus species, and Streptococcus species

  • Bacilli: Corynebacterium species, Clostridium  species, and Listeria species

  • Examples of gram-negative organisms are [9 ]:

  • Кокки: Neisseria gonorrheae, Neisseria meningitidis, и Moraxella виды

  • Bacilli: Escherichia Coil, Pseudomonas , Proteus Виды и Klebsiella Виды

  • Примеры вариабельи Грамэллы. С включающими:

  • Примеры.

    Нормальные и критические результаты

    Нормальным результатом в стерильной жидкости организма должно быть отсутствие каких-либо патологических организмов в мазке. Организмы идентифицируются по цвету и форме. Грамположительные микроорганизмы имеют пурпурную или синюю окраску, а грамотрицательные — розовую или красную. Бациллы имеют палочковидную форму, а кокки – сферическую.

    Выводы при окрашивании по Граму, указывающие на лежащую в основе бактериальную инфекцию:

    • Грамположительные кокки в скоплениях: обычно характерны для видов Staphylococcus , таких как S. aureus.

    • Грамположительные кокки в цепочках: обычно характерны для видов Streptococcus , таких как S. pneumoniae, стрептококки группы B

    • 0096 Micrococcus spp.

    • Грамположительные палочки, толстые: Обычно характерны для Clostridium spp., например C. perfringes , C. septicum .

    • Грамположительные палочки, тонкие: обычно характерны для Listeria spp.

    • Грамположительные палочки разветвленные: обычно характерны для Actinomyces и Nocardia .

    • Грамотрицательные диплококки: обычно характерны для виды Neisseria , такие как N.meningitidis .

    (Please note: Moraxella spp., and Acinetobacter  spp., are often diplococcal in morphology. Acinetobacter can sometimes appear as Gram-positive cocci, and they can be pleomorphic.

    • Coccobacilli : обычно характерны для Acinetobacter spp., и они могут быть грамположительными, грамотрицательными или грамвариабельными

    • Грамотрицательные палочки, тонкие: обычно характерны для Enterobacteriaceae , например E. coli .

    • Коккобациллы: обычно характерны для видов Hemophilus , таких как H. influenzae .

    • Изогнутый: обычно характерен для Vibrio spp.,; Campylobacter spp., такие как V. cholerae и C. jejuni .

    • Форма тонкой иглы: обычно характерна для Fusobacterium spp.

    Грамвариабельные организмы: эти организмы не группируются ни в грамположительные, ни в грамотрицательные организмы.

    Мешающие факторы

    Если образец нестерильный, образец может быть контаминирован несколькими микроорганизмами. Точно так же неправильный сбор образцов и предшествующее использование антибиотиков могут помешать росту микроорганизмов. Во время интерпретации окраски по Граму, как описано Всемирной организацией здравоохранения в 2003 г., необходимо выполнить следующие шаги:

    1. Общий характер мазка требует анализа при малом увеличении (10X)

    • Фон предметного стекла, как правило, должен быть грамотрицательным или прозрачным

    • Лейкоциты, если они присутствуют, должны окрашиваться как грамотрицательные bacillus бактерии

    • Мазок должен быть толщиной в одну клетку без наложения клеток

    2. При малом увеличении следует отметить следующее:

    • Относительное количество полиморфноядерных нейтрофилов (ПЯН), мононуклеарных клеток и эритроцитов (эритроцитов)

    • Относительное количество клеток плоского эпителия и бактерий нормальной микробиоты

    3. Иммерсионное обследование нескольких месторождений необходимо учитывать следующее:

    • Микроорганизмы: если идентифицированы, укажите количество и морфологию и уплощенная

    • Внешний вид сторон: параллельные, яйцевидные, неправильные или вогнутые

    • Ось тела: прямая, изогнутая или спиральная

    • Плеоморфизм (вариация формы)

    • Ветвление или клеточные расширения

    Осложнения

    Интерпретация препаратов может быть затруднена, если микроскопический мазок толстый и слипшийся. Время обесцвечивания следует очень тщательно контролировать, чтобы избежать недостаточного или чрезмерного обесцвечивания. Более толстые мазки требуют более длительного времени обесцвечивания. Точно так же культуры должны подвергаться оценке, пока они еще свежие. Старые культуры, как правило, теряют пептидогликановые клеточные стенки, что предрасполагает грамположительные клетки к грамотрицательным или грамвариабельным. Окрашивание по Граму бесполезно для организмов без клеточной стенки, таких как Mycoplasma видов и для более мелких бактерий, таких как Chlamydia и Rickettsia видов.

    Окрашивание по Граму не может ложно выявить микроорганизмы в следующем сценарии:

    • Использование антибиотиков перед взятием образца

    • Несоответствующий возраст культуры: слишком молодой или слишком старый

    • Фиксация мазка до его высыхания

    • Слишком густой мазок0300

      Low concentration of crystal violet

    • Excessive heat fixation

    • Excessive washing between steps

    • Insufficient exposure to iodine

    • Prolonged decolorization

    • Excessive counterstaining

    • Lack of experience in подготовка предметного стекла и просмотр предметного стекла

    Иногда результаты окрашивания по Граму могут не совпадать с окончательными результатами посева и потенциально могут привести к ненадлежащему использованию антибиотиков. [10]

    Клиническое значение

    Окрашивание по Граму часто является начальным диагностическим тестом для оценки инфекций. Использование окраски по Граму облегчает быстрое применение соответствующих антибиотиков. Однако генетические последовательности и молекулярные методы более специфичны, чем классическое окрашивание по Граму.

    Контрольные вопросы

    • Доступ к бесплатным вопросам с несколькими вариантами ответов по этой теме.

    • Комментарий к этой статье.

    Каталожные номера

    1.

    БАРТОЛОМЬЮ Дж. В., МИТТВЕР Т. Окрашивание по Граму. Bacteriol Rev. 1952 Mar; 16(1):1-29. [Бесплатная статья PMC: PMC180726] [PubMed: 14925025]

    2.

    O’Toole GA. Классический обзор: как работает окраска по Граму. J Бактериол. 2016 01 декабря;198(23):3128. [Бесплатная статья PMC: PMC5105892] [PubMed: 27815540]

    3.

    LIBENSON L, McILROY AP. О механизме окрашивания по Граму. J заразить Dis. 1955 г., июль-август; 97 (1): 22–6. [В паблике: 13242849]

    4.

    ШУГАР Д., БАРАНОВСКАЯ Ю. Исследования по окрашиванию по Граму; Значение белков в реакции Грама. Acta Microbiol Pol (1952). 1954;3(1):11-20. [PubMed: 13147751]

    5.

    HASLETT AS. Химическое значение теста Грама для бактерий. Aust J Sci. 1947 21 июня; 9 (6): 211. [PubMed: 20255991]

    6.

    Попеску А., Дойл Р.Дж. Окраска по Граму спустя более века. Биотехнологический гистохим. 1996 мая; 71(3):145-51. [PubMed: 8724440]

    7.

    МИТТВЕР Т, БАРТОЛОМЬЮ Дж. В., КАЛЛМАН Б. Дж. Механизм реакции Грама. II. Функция йода в окраске по Граму. Технология окрашивания. 1950 окт; 25 (4): 169-79. [PubMed: 14782050]

    8.

    Уилсон МЛ. Клинически значимая, рентабельная клиническая микробиология. Стратегии сокращения ненужного тестирования. Ам Джей Клин Патол. 1997 г., февраль; 107 (2): 154–67. [PubMed:

    64]

    9.

    Беверидж Т.Дж., Дэвис Дж.А. Клеточные реакции Bacillus subtilis и Escherichia coli на окраску по Граму. J Бактериол. 1983 г., ноябрь; 156 (2): 846-58. [Статья бесплатно PMC: PMC217903] [PubMed: 6195148]

    10.

    Rand KH, Tillan M. Ошибки в интерпретации окрашивания по Граму из положительных культур крови. Ам Джей Клин Патол. 2006 ноябрь; 126 (5): 686-90. [PubMed: 17050065]

    4.1: Введение в окрашивание — биология LibreTexts

    1. Последнее обновление
    2. Сохранить как PDF
  • Идентификатор страницы
    52240
    • Джоан Петерсен и Сьюзан Маклафлин
    • Общественный колледж Квинсборо
    6

    Цели обучения

    • Описать различия между методами простого окрашивания и дифференциального окрашивания.
    • Обсудите, как приготовить бактериальный мазок из культивируемых организмов.
    • Различают грамположительные и грамотрицательные бактерии.
    • Опишите процесс окрашивания по Граму.
    • Используйте микроскопию для исследования клеток, окрашенных по Граму.
    • Опишите некоторые специальные процедуры окрашивания и просмотрите их примеры при погружении в масло.

     

    Почему мы должны окрашивать бактерии?

    Большинство типов клеток не имеют большого количества естественного пигмента, и поэтому их трудно увидеть под световым микроскопом, если они не окрашены. Несколько типов красителей используются, чтобы сделать бактериальные клетки более заметными. Кроме того, можно использовать специальные методы окрашивания для определения биохимических или структурных свойств клеток, таких как тип клеточной стенки и наличие или отсутствие эндоспор. Этот тип информации может помочь ученым идентифицировать и классифицировать микроорганизмы и может использоваться поставщиками медицинских услуг для диагностики причины бактериальной инфекции.

     

    Простая окраска

    Одним из типов процедуры окрашивания, которую можно использовать, является простая окраска , при которой используется только одна окраска, и все типы бактерий проявляются цветом этой окраски при просмотре под микроскоп. Некоторые красители, обычно используемые для простого окрашивания, включают кристаллический фиолетовый, сафранин и метиленовый синий. Простые окраски можно использовать для определения морфологии и расположения видов бактерий, но они не дают никакой дополнительной информации. Живые бактерии почти бесцветны и не создают достаточного контраста с водой, в которой они взвешены, чтобы быть хорошо видимыми. Целью окрашивания является увеличение контраста между организмами и фоном, чтобы их было легче увидеть в световой микроскоп. При простом окрашивании бактериальный мазок окрашивается раствором одного красителя, который окрашивает все клетки в один цвет без дифференциации типов или структур клеток. В нашей лаборатории используется единственный краситель – метиленовый синий, основной краситель. Основные красители, имеющие положительный заряд, прочно связываются с отрицательно заряженными компонентами клеток, такими как бактериальные нуклеиновые кислоты и клеточные стенки.

     

    Изображение 1: Вид под микроскопом бактерий в форме палочек (палочков), окрашенных кристаллическим фиолетовым. Изолировано и изображено Мунтасиром Аламом, Университет Дакки, факультет микробиологии, в 2007 г.

    Смотреть видео 1: Как нанести простой краситель на бактериальную культуру от NC BioNetwork (4:05) URL: https://youtu.be/8ODeT9DLHKI

     

    Окраска по Граму

    Ученые часто выбирают дифференциальную окраску , поскольку это позволяет им собрать дополнительную информацию о бактериях, с которыми они работают. Дифференциальные красители используют более одного красителя, и клетки будут иметь различный внешний вид в зависимости от их химических или структурных свойств. Некоторыми примерами дифференциального окрашивания являются окрашивание по Граму, кислотоустойчивое окрашивание и окрашивание эндоспор. Вы узнаете, как подготовить бактериальные клетки к окрашиванию, и узнаете о методе окрашивания по Граму.

    Эта широко используемая процедура окрашивания была впервые разработана датским бактериологом Гансом Кристианом Грамом в 1882 г. (опубликовано в 1884 г.) при работе с образцами тканей легких пациентов, умерших от пневмонии. С тех пор процедура окрашивания по Граму повсеместно используется микробиологами для получения важной информации о видах бактерий, с которыми они работают. Знание реакции Грама клинического изолята может помочь медицинскому работнику поставить диагноз и выбрать подходящий антибиотик для лечения.

    Результаты окрашивания по Граму отражают различия в составе клеточной стенки. Грамположительные клетки имеют толстые слои пептидогликана (углевода) в клеточных стенках; грамотрицательных бактерий очень мало. Грамположительные бактерии также содержат тейхоевые кислоты, а грамотрицательные – нет. Грамотрицательные клетки имеют наружную мембрану, напоминающую фосфолипидный бислой клеточной мембраны. Наружная мембрана содержит липополисахариды (ЛПС), которые высвобождаются в виде эндотоксинов при гибели грамотрицательных клеток. Это может беспокоить человека с инфекцией, вызванной грамотрицательным микроорганизмом.

    Изображение 2: Микроскопическое изображение окраски по Граму смешанных грамположительных кокков ( Staphylococcus aureus ATCC 25923, фиолетовый) и грамотрицательных бацилл ( Escherichia coli 75 ATCC 1, красный). Увеличение: 1000. Изображение Y Тамбе. https://commons.wikimedia.org/wiki/F…m_stain_01.jpg

     

    На рисунке 1 ниже показаны основные различия между грамположительными и грамотрицательными клеточными стенками. Различия в составе клеточной стенки отражаются в том, как клетки реагируют на красители, используемые в процедуре окрашивания по Граму.

    Окрашивание по Граму лучше всего проводить на свежих культурах — более старые клетки могут иметь поврежденные клеточные стенки и не давать правильной реакции по Граму. Некоторые виды известны как грампеременных , поэтому на предметном стекле могут быть видны как грамположительные, так и грамотрицательные реакции.

    Неправильная техника окрашивания может привести к неточным результатам. Одним из наиболее важных этапов окрашивания по Граму является этап обесцвечивания (использование спирта/ацетона). Если обесцвечиватель не оставлять на достаточно долгое время, он не сможет различать грамположительные и грамотрицательные бактерии. На этом этапе используется обесцвечиватель, изготовленный из смеси спирта и ацетона. Его функция у грамотрицательных бактерий заключается в удалении внешней клеточной мембраны и тонкого слоя пептидогликана. Клеточная мембрана в основном состоит из липидов и чувствительна к спиртам. При растворении этих слоев комплекс кристаллический фиолетовый-йод также удаляется, и, таким образом, грамотрицательные бактерии теперь могут поглощать вторичный краситель, сафранин, который используется на последнем этапе окрашивания по Граму, окрашивая их в розовато-красный цвет и дифференцируя между ними и грамположительными, которые благодаря своему толстому пептидогликановому слою сохранили первичную окраску, кристаллический фиолетовый, и выглядят пурпурно-синими. С другой стороны, если вы используете слишком много обесцвечивателя, он может обесцветить образец на предметном стекле, что приведет к потере комплекса кристаллический фиолетовый (основной краситель) с йодом. Стадия обесцвечивания чувствительна из-за структуры клеточной стенки. Даже грамположительные бактерии с их толстыми клеточными стенками могут чрезмерно обесцвечиваться, что приводит к потере пептидогликанового слоя и комплекса кристаллический фиолетовый-йод. Когда на последнем этапе используется вторичный краситель, сафранин, грамположительные бактерии подхватывают это окрашивание и становятся красновато-розовыми, а не пурпурно-синими. Посмотрите видео 2 для примера этого.

    Еще одна распространенная ошибка заключается в приготовлении бактериального мазка, который является первым этапом любой процедуры окрашивания. Это включает в себя нанесение тонкой пленки бактерий на предметное стекло микроскопа, а затем термофиксацию   с помощью горелки Бунзена, баксинизатора или нагревателя предметного стекла. Основная цель этого шага — прикрепить бактериальные клетки к предметному стеклу микроскопа (это также денатурирует белки и убивает их). Если вы забудете сделать этот шаг, клетки будут «смываться» на всех последующих этапах процесса окрашивания. У вас буквально не будет клеток на предметном стекле для окрашивания!

    Хотя подавляющее большинство бактерий либо грамположительны, либо грамотрицательны, важно помнить, что не все бактерии можно окрасить с помощью этой процедуры (например, микоплазмы, не имеющие клеточной стенки, плохо окрашиваются по Граму). .

    Рисунок 1:  грамположительные и грамотрицательные клеточные стенки

     

    Смотреть видео 2: Окрашивание по Граму Анимация и обсуждение происходящего на каждом этапе

    Смотреть видео 2 : Анимация окрашивания по Граму с описанием каждого шага и интерпретацией того, что происходит на каждом шаге на

    Доктор Г. Бхану Пракаш Медицинские анимированные видеоролики. (3:37) URL https://youtu.be/AZS2wb7pMo4

     

    Смотреть видео 3. Процедура окрашивания по Граму

    Смотреть видео 2. Процедура окрашивания по Граму , снято в микробиологических лабораториях штата Северная Каролина. (5:58). URL: https://youtu.be/H-fxk1be1hQ

     

    Специальные красители

    Существует множество процедур окрашивания, используемых для выявления конкретных внешних или внутренних структур, которые не обнаруживаются у всех видов бактерий, например, окрашивание капсулы. и пятно на жгутиках. Изображения и другие примеры специализированных пятен см. ниже и в следующем разделе 4.2 специализированных методов окрашивания бактерий.

    Краситель для капсул

    Некоторые бактерии выделяют богатую полисахаридами структуру за пределами клеточной стенки, называемую гликокаликсом. Если гликокаликс тонкий и слабо прикреплен, его называют слоем слизи ; если он толстый и плотно связан с клеткой, его называют капсулой . Гликокаликс может защищать клетку от высыхания и позволяет клетке прилипать к поверхностям, таким как ткани в организме. Они также могут обеспечивать защиту клеток от обнаружения и фагоцитоза иммунными клетками и способствовать образованию биопленки: таким образом, гликокаликс может действовать как фактор вирулентности; (способствует способности организма вызывать заболевание).

    Капсулы можно обнаружить с помощью процедуры негативного окрашивания , при которой фон (препарат) и бактерии окрашиваются, но капсула не окрашивается. Капсула выглядит как четкая неокрашенная зона вокруг бактериальной клетки. Поскольку капсулы разрушаются при нагревании, процедура окрашивания капсул проводится без термофиксации бактерий.

    Серебряный краситель

    Жгутики (длинные хлыстообразные структуры, используемые для подвижности бактерий) и некоторые бактерии (например, spirochetes ) слишком тонкие, чтобы их можно было наблюдать при обычных процедурах окрашивания. В этих случаях используется серебристый краситель . Нитрат серебра наносят на бактерии вместе со специальной протравой; нитрат серебра осаждается вокруг жгутиков или тонких бактерий, утолщая их, чтобы их можно было наблюдать под световым микроскопом.

     

    Эта страница под названием 4.1: Введение в окрашивание распространяется в соответствии с лицензией CC BY-NC-SA, автором, ремиксом и/или куратором этой страницы являются Джоан Петерсен и Сьюзен Маклафлин.

    1. Наверх
      • Была ли эта статья полезной?
      1. Тип изделия
        Раздел или страница
        Автор
        Джоан Петерсен и Сьюзен Маклафлин
        Лицензия
        CC BY-NC-SA
        Показать оглавление
        нет
      2. Теги
        1. Капсульная окраска
        2. грамм окрашивание
        3. Окрашивание серебром
        4. источник[1]-био-15964
        5. источник[2]-био-15964

      CDC — DPDx — Процедуры диагностики

      Окрашивание мазков крови

      Окрашивайте только один набор мазков, дубликаты оставляйте неокрашенными. Последнее пригодится, если возникнут проблемы во время окрашивания и/или если вы захотите позже отправить мазки в референс-лабораторию.

      Окраска по Райту (Райт-Гимзе)

      Применяемая в гематологии, эта окраска не оптимальна для кровепаразитов. Его можно использовать, если необходимы быстрые результаты, но его следует по возможности дополнить подтверждающей окраской по Гимзе, чтобы можно было продемонстрировать точки Шюффнера.

      Окраска по Гимзе

      Рекомендуется для обнаружения и идентификации паразитов крови.

      1. Стандартный буфер Гимзы 100 × — 0,67 М
        Na2HPO4 59,24 г
        Нах3ПО4х3О 36,38 г
        Вода деионизированная 1000,00 мл

        Автоклав или фильтр-стерилизация (поры 0,2 мкм). Стерильный буфер стабилен при комнатной температуре в течение одного года.

      2. Рабочий буфер Гимзы – 0,0067 М, рН 7,2
        Буферный раствор Гимзы 10,0 мл
        Вода деионизированная 990,0 мл

        Перед использованием проверьте pH. Должно быть 7.2. Стабилен при комнатной температуре в течение одного месяца.

      3. . Тритон Х-100 5%
        Вода деионизированная (нагретая до 56°C) 95,0 мл
        Тритон Х-100 5,0 мл

        Предварительно нагрейте деионизированную воду и медленно добавляйте Triton X-100, взбалтывая, чтобы перемешать.

      4. Стандартный краситель по Гимзе (краситель по Гимзе доступен в продаже, но следующий состав дает более стабильные результаты и не имеет срока годности)
        Стеклянные бусины, 3,0 мм 30,0 мл
        Абсолютный метанол, без ацетона 270,0 мл
        Порошок для окрашивания по Гимзе (сертифицированный) 3,0 г
        Глицерин 140,0 мл
        1. Поместите в коричневую бутылку объемом 500 мл стеклянные шарики и другие ингредиенты в указанном порядке. Плотно завинтить крышку. Используйте чистую и сухую стеклянную посуду.
        2. Поместите бутылки под углом на шейкер; встряхивать умеренно от 30 до 60 минут ежедневно, по крайней мере 14 дней.
        3. При хранении плотно закупоренным и обезвоженным краситель Гимза остается стабильным при комнатной температуре в течение неопределенного времени (со временем окрашивание улучшается).
        4. Непосредственно перед использованием встряхните флакон. Отфильтруйте небольшое количество этого маточного красителя через фильтровальную бумагу Whatman #1 в пробирку. Пипеткой из этой пробирки приготовить рабочее окрашивание по Гимзе.
      5. Рабочий краситель Гимза (2,5%): делают свежим для каждой партии мазков.
        Рабочий буфер Гимзы 39 мл
        Краситель Гимзы 1 мл
        5% Тритон Х-100 2 капли
      Окрашивание
      1. Приготовьте свежий рабочий краситель Гимза в банке для окрашивания в соответствии с указаниями выше. (40 мл адекватно заполняют стоячую банку Coplin; для банок другого размера адаптируйте объем, но не меняйте пропорции).
      2. Налейте 40 мл рабочего буфера Гимзы во вторую банку для окрашивания. Добавьте 2 капли Triton X-100. Адаптируйте объем к размеру банки.
      3. Поместите предметные стекла в рабочий краситель Гимза (2,5%) на 45-60 минут.
      4. Удалите тонкие предметные стекла и промойте их 3–4 раза погружением в буфер Гимза. Толстые мазки следует оставить в буфере на 5 минут.
      5. Сушите предметные стекла в вертикальном положении на штативе.

      Примечание: В качестве альтернативы этим 45-60 минутам в 2,5% красителях по Гимзе мазки можно окрашивать в течение более короткого времени в более концентрированных красителях. Одна альтернатива составляет 10 минут в 10% Гимза; более короткие пятна дают более быстрые результаты, но используют больше красителей и могут иметь менее предсказуемое качество.

      Процедура окрашивания: контроль качества

      Чтобы гарантировать получение надлежащих результатов окрашивания, положительный мазок (малярия) должен быть включен в каждую новую партию рабочего красителя Гимзы. Так как качественные мазки для контроля качества недоступны в продаже, их можно приготовить из крови пациента и хранить для будущего использования следующим образом: встречается в каждых 2-3 полях.

    3. Сделайте как можно больше тонких мазков, предпочтительно в течение одного часа после забора крови у пациента.
    4. Дайте мазкам быстро высохнуть с помощью вентилятора или воздуходувки при комнатной температуре.
    5. Фиксация мазков в абсолютном (100%) метаноле; дайте им высохнуть.
    6. Поместите их, соприкасаясь спереди и сзади, в коробку, не разделяя пазов.
    7. Наклейте снаружи коробки этикетку с названием вида, датой и «Контрольными предметными стеклами Гимзы».
    8. Хранить при температуре -70°C (или ниже), если целью является изготовление предметных стекол для контроля качества.
    9. Непосредственно перед использованием выньте мазок из коробки и дайте испариться конденсату; пометьте слайд «+ малярия» и поставьте текущую дату. Теперь мазок готов к окрашиванию, поскольку ранее он был зафиксирован.

      10. CDC — DPDx — Диагностические процедуры

      Модифицированная процедура кислотоустойчивого окрашивания

      Этот метод полезен для идентификации ооцист видов кокцидий ( Cryptosporidium , Cystoisospora и Cyclospora0358), которые может быть трудно обнаружить обычными красителями, такими как трихром. В отличие от модифицированного кислотостойкого красителя Циля-Нильсена, этот краситель не требует нагревания реагентов для окрашивания.

      Образец:

      Можно использовать концентрированный осадок свежего или законсервированного формалином стула. Другие типы клинических образцов, такие как дуоденальная жидкость, желчь, легочные образцы (индуцированная мокрота, бронхиальный смыв, биопсия) также могут быть окрашены.

      Реагенты:

      Эта процедура состоит из четырех этапов, требующих следующих решений:

      1. Метанол абсолютный
      2. Кислотный спирт: 10 мл серной кислоты + 90 мл абсолютного этанола. Хранить при комнатной температуре.
      3. Kinyoun’s Carbol fuchsin: можно приобрести в коммерческих целях.
      4. 3% малахитовый зеленый: растворить 3 г малахитового зеленого в 100 мл дистиллированной воды. Хранить при комнатной температуре.
      Процедура:
      1. Приготовьте мазок с 1–2 каплями образца на предметном стекле и высушите на предметном стекле при температуре 60°C до полного высыхания. Не делайте мазки слишком толстыми!
      2. Фиксация абсолютным метанолом в течение 30 секунд.
      3. Окрашивание карболовым фуксином Киньюна в течение одной минуты. Кратковременно промойте дистиллированной водой и слейте.
      4. Обезжирить кислым спиртом в течение 2 минут. Промыть дистиллированной водой и слить.
      5. Контрастное окрашивание малахитовым зеленым в течение 2 минут. Кратковременно промойте дистиллированной водой и слейте.
      6. Высушите на нагревателе для предметных стекол при 60°C в течение примерно 5 минут. Гора с покровным стеклом с помощью желаемого монтажного носителя.
      7. Обследуйте от 200 до 300 полей зрения, используя объективы 40× или выше. Для подтверждения внутренней морфологии используйте иммерсионный объектив с увеличением 100×.
      Контроль качества:

      Контрольное стекло Cryptosporidium spp. из образца, законсервированного 10% формалином, следует включать в каждый цикл окрашивания. Cryptosporidium spp. окрашивается в розово-красный цвет. Фон должен равномерно окрашиваться в зеленый цвет.

      Процедура хромотропного окрашивания

      Этот метод окрашивания был разработан в CDC с использованием различных компонентов метода окрашивания трихромом для дифференциации спор микроспоридий от фоновых фекальных элементов.

      Образец:

      Приготовьте тонкий мазок, используя примерно 10 мкл фиксированной 10% формалиновой взвеси кала (неконцентрированной) на предметном стекле. Можно также использовать концентраты формалина, но количество микроорганизмов будет практически таким же, как и до концентрирования. Зафиксировать на предметном стекле при температуре 60°C до полного высыхания (5-10 минут).

      Реагенты:

      Эта процедура состоит из шести этапов, требующих следующих растворов:

      1. Абсолютный метанол
      2. Хромотропное пятно:
        Хромотроп 2R 6,00 г
        Светлый зеленый 0,15 г
        Фосфорно-вольфрамовая кислота 0,70 г
        Ледяная уксусная кислота 3,00 мл

        Смешайте ингредиенты и дайте постоять 30 минут. Затем добавить 100 мл дистиллированной воды. Готовьте свежий для использования каждый месяц.

      3. Кислый спирт:
        90% этанол 995,5 мл
        Ледяная уксусная кислота 4,5 мл
      4. 95% этанол
      5. 100% этанол
      6. Ксилол или заменитель ксилола
      Процедура:
      1. Фиксация мазка в абсолютном метаноле в течение 5 минут.
      2. Поместить в хромотропную краску на 90 минут.
      3. Обезжирить в кислом спирте всего от 1 до 3 секунд.
      4. Промыть 95% этанолом путем погружения.
      5. Поместить в две смены 100% этанола по 3 минуты каждую.
      6. Поместить две смены ксилола или заменителя ксилола по 10 минут каждую.
      7. Слейте предметное стекло и поместите его вместе с покровным стеклом, используя монтажную среду (например, пермаунт). Исследуйте мазок после высыхания, используя не менее 100-кратного погружения объектива в масло или выше. Обследовать не менее 200–300 нефтеиммерсионных полей.
      Контроль качества:

      Контрольное стекло микроспоридий из образца, консервированного 10% формалином, должно быть включено в каждый цикл окрашивания. Споровые стенки микроспоридий окрашиваются в розовато-красный цвет и имеют размер около 1 мкм. Меняйте все растворы после окрашивания хромотропом через каждые 10 предметных стекол, чтобы добиться надлежащего ополаскивания и обезвоживания. Для точности рекомендуется микроскоп с хорошей оптикой. Используйте по крайней мере 100-кратное увеличение иммерсионного масла для обнаружения организмов; более высокие увеличения лучше. Из-за сложности идентификации этих мелких спор рекомендуется, чтобы второй считыватель подтвердил положительный диагноз.

      Процедура окрашивания Quick-Hot по Граму

      Это альтернатива хромотропной окраске, которая представляет собой быстрый, надежный и простой метод окрашивания мазков для выявления спор микроспоридий в фекалиях и других клинических образцах.

      Образец:

      Приготовьте тонкий мазок окрашиваемого материала (например, фекалий, мочи, мокроты, слюны и надосадочной жидкости клеточных культур) и высушите на воздухе.

      Фиксированные формалином и залитые в парафин срезы тканей депарафинизируйте, как обычно, гидратируйте в ряде спиртов и поместите предметные стекла в воду перед окрашиванием по Граму.

      Реагенты:
      1. Набор для окрашивания по Граму
      2. Хромотропное пятно:
        Хромотроп 2R 1,0 г
        Светлый зеленый 0,15 г
        Фосфорно-вольфрамовая кислота 0,25 г
        Ледяная уксусная кислота 3,0 мл

        Смешайте сухие ингредиенты, затем добавьте уксусную кислоту. Дайте постоять 30 минут, а затем добавьте 100 мл дистиллированной воды. Готовьте свежий для использования каждый месяц.

      3. Кислый спирт:
        90% этанол 995,5 мл
        Ледяная уксусная кислота 4,5 мл
      4. 95% этанол
      5. 100% этанол

      Примечание: В дополнение к перечисленным реагентам требуется метод нагревания реагентов и поддержания определенной температуры. Поскольку нагревать нужно только хромотропную краску, достаточно будет горячей плиты.

      Процедура:
      1. Мазок с термофиксацией (3 раза по 1 секунде каждый раз на медленном огне или 5 минут на подогревателе предметных стекол, установленном на 60°C). Остудить до комнатной температуры.
      2. Окрасьте по Граму, минуя стадию сафранина, следующим образом:
        1. Поместите предметные стекла в раствор генцианвиолета и оставьте на 30 секунд. Для срезов тканей увеличьте время до 1 минуты.
          2. №
        2. Аккуратно смойте излишки красителя водой.
        3. Предметные стекла заливают раствором йода Грама и оставляют на предметном стекле на 30 секунд. Для срезов тканей увеличьте время до 1 минуты.
        4. Удалите раствор йода Грама, осторожно промыв его раствором для обесцвечивания. Держите предметное стекло под углом и по каплям добавляйте обесцвечивающий раствор до тех пор, пока он не станет бесцветным. Будьте особенно осторожны на этом этапе, чтобы добиться правильного окрашивания спор.
        5. Аккуратно промойте предметное стекло холодной водой, чтобы удалить избыток раствора обесцвечивателя.
      3. Выполните хромотропное окрашивание следующим образом:
        1. Поместите предметное стекло в подогретый (от 50° до 55°C) хромотропный краситель не менее чем на 1 минуту. Для срезов тканей увеличьте время на 30 секунд.
        2. Прополощите в 90% растворе кислоты и спирта в течение 1–3 секунд. Будьте особенно осторожны на этом этапе, чтобы добиться правильного окрашивания спор.
        3. Промыть 95% этанолом в течение 30 секунд.
        4. Промойте дважды, каждый раз по 30 секунд, в 100% этаноле (для этого этапа требуются два отдельных контейнера). Дайте высохнуть, затем закрепите Cytoseal60 (Stephens Scientific) или другим подходящим герметиком, следуя инструкциям. Для срезов тканей мы рекомендуем перед монтажом предварительно промыть предметные стекла в растворе 50% этилового спирта/50% ксилола в течение 15 секунд.
      Контроль качества:

      Контрольное стекло со спорами микроспоридий из образца, законсервированного 10% формалином, должно быть включено в каждый цикл окрашивания.

      В образцах фекалий споры микроспоридий должны выглядеть как окрашенные в темный цвет фиолетово-яйцевидные структуры на бледно-зеленом фоне. Дрожжевые клетки, если они присутствуют, должны окрашиваться в темно-фиолетовый или розовато-красный цвет и легко отличимы от спор микроспоридий.

      В цитологических препаратах споры микроспоридий должны окрашиваться от темно-фиолетового до розово-фиолетового цвета и могут содержать грамположительные гранулы. Иногда споры демонстрируют заметную полосу в виде экваториального пояса.

      Ссылка:

      Moura H, Schwartz DA, Bornay-Llinares F, et al. 1997. Новый и усовершенствованный метод «быстро-горячего хромотропа», который дифференциально окрашивает споры микроспоридий в клинических образцах, включая срезы ткани, залитые парафином. Arch Pathol Lab Med.121:888-893.

      Метод модифицированного сафранина (горячий метод) Процедура окрашивания

      Для Cyclospora , Cryptosporidia и Cystoisospora видов:

      Ооцисты из Cyclospora в клинических образцах обычно обнаруживают с помощью модифицированного кислотостойкого окрашивания (холод). Однако при использовании этого метода ооцисты окрашиваются по-разному: от неокрашенного до полного окрашивания, что может привести к ошибочной идентификации. Метод модифицированного сафранина дает более равномерное окрашивание этих ооцист. Пятно необходимо нагреть до кипения с помощью горячей плиты или микроволновой печи.

      Образец:

      Можно использовать концентрированный осадок свежего или законсервированного формалином стула. Другие типы клинических образцов, такие как дуоденальная жидкость, также могут быть окрашены.

       

      Реагенты:
      Эта процедура состоит из трех этапов, требующих следующих растворов:

      1. Кислотный спирт (3% HCl/метанол): медленно добавьте 3 мл соляной кислоты к 97 мл абсолютного метанола. Хранить при комнатной температуре в плотно закрытой таре.
      2. Окрашивание сафранином (доступно в наборах для окрашивания по Граму)
      3. 3% малахитовый зеленый: растворить 3 г малахитового зеленого в 100 мл дистиллированной воды. Хранить при комнатной температуре.
      Процедура:
      1. Приготовьте тонкий мазок на предметном стекле и высушите на нагревателе для предметного стекла.
      2. Зафиксировать в кислом спирте на 5 минут.
      3. Промыть дистиллированной водой.
      4. Поместите в кипящий сафранин на 1 минуту.
      5. Промыть дистиллированной водой.
      6. Докрашивание малахитовым зеленым в течение 1 минуты.
      7. Кратковременно промыть дистиллированной водой.
      8. Высушите предметное стекло и покройте покровным стеклом, используя желаемую среду для заливки.
      Контроль качества:

      Контрольное стекло Cyclospora spp. из образца, законсервированного 10% формалином, следует включать в каждый цикл окрашивания. Cyclospora spp. ооцисты окрашиваются в красновато-оранжевый цвет. Фон должен равномерно окрашиваться в зеленый цвет.

       

      Процедура окрашивания трихромом

      Общепризнано, что окрашенные фекальные пленки являются единственным наиболее эффективным средством исследования кала на кишечные простейшие. Постоянно окрашенный мазок облегчает обнаружение и идентификацию цист и трофозоитов и обеспечивает постоянную регистрацию встречающихся простейших. На окрашенном мазке часто видны мелкие простейшие, пропущенные при исследовании влажного препарата (как неконцентрированного, так и концентрированного образца). Техника трихрома Уитли для образцов фекалий является модификацией оригинальной процедуры окрашивания ткани Гомори. Это быстрая и простая процедура, позволяющая получить однородно хорошо окрашенные мазки кишечных простейших, клеток человека, дрожжей и артефактного материала.

      Образец:

      Образцы обычно состоят из свежего стула или стула, зафиксированного в поливиниловом спирте (ПВС), намазанного на предметные стекла микроскопа и высушенного на воздухе или на подогреве предметного стекла при температуре 60°C. Также можно использовать стул, консервированный в растворе ацетата натрия, уксусной кислоты и формалина (SAF), или некоторые фиксаторы в одном флаконе.

      Реагенты:

      Эта процедура состоит из семи этапов, требующих следующих растворов:

      1. 70% этанол плюс йод: приготовьте исходный раствор, добавляя кристаллы йода к 70% спирту, пока не получите темный раствор. Для использования разбавьте бульон 70% спиртом до получения темно-красновато-коричневого цвета или цвета крепкого чая.
      2. 70% этанол (дважды)
      3. Trichrome Stain: можно приобрести отдельно
      4. 90% кислый этанол
        90% этанол 99,5 мл
        Уксусная кислота (ледяная) 0,5 мл
      5. 95% этанол
      6. 100% этанол (дважды)
      7. Ксилол или заменитель ксилола (дважды)
      Процедура:
      1. Для мазков ПВС поместите предметное стекло в 70% этанол с добавлением йода на 10 минут. Для других фиксаторов следуйте инструкциям производителя. Пропустите этап с йодом для консервантов, не содержащих хлорид ртути.
      2. Поместите слайд в 70% этанол на 5 минут.
      3. Поместить во второй 70% этанол на 3 минуты
      4. Поместите в трихромовый краситель на 10 минут.
      5. Обезжирить в 90% растворе этанола с уксусной кислотой в течение 1–3 секунд.
      6. Несколько раз промыть 100% этанолом.
      7. Поместить в две смены 100% этанола по 3 минуты каждую.
      8. Поместите две смены ксилола или заменителя ксилола на 10 минут.
      9. Смонтировать с покровным стеклом, используя монтажную среду (например, пермаунт).
      10. Исследуйте мазок под микроскопом, используя объектив 100×. Обследовать не менее 200–300 нефтеиммерсионных полей.
      Контроль качества:

      Контрольное стекло известных простейших, таких как Giardia spp. из образца, сохраненного ПВА, следует включать в каждый цикл окрашивания. При тщательной фиксации мазка и правильной окраске цитоплазма простейших трофозоитов будет иметь сине-зеленую окраску, иногда с фиолетовым оттенком. Кисты имеют тенденцию быть немного более фиолетовыми. Ядра и включения (хроматоидные тельца, эритроциты, бактерии) и кристаллы Шарко-Лейдена имеют красную окраску, иногда с фиолетовым оттенком. Гликоген растворяется в растворителях и появляется в организме в виде прозрачной области. Фоновый материал обычно окрашивается в зеленый цвет, обеспечивая приятный цветовой контраст с простейшими.

      Процедура окрашивания Calcofluor White

      Этот химиофлуоресцентный метод полезен для обнаружения микроспоридий, Acanthamoeba spp., Pneumocystis jiroveci и Dirofilaria spp. Химиофлуоресцентные агенты, такие как Calcofluor, Fungi-Fluor или Uvitex 2B, также известные как оптические отбеливатели, являются быстродействующими и недорогими агентами для скрининга. Эти реагенты чувствительны, но неспецифичны, поскольку многие объекты и организмы, кроме паразитов, могут флуоресцировать. Этот тест следует использовать в качестве инструмента быстрого скрининга, а не для идентификации видов.

      Образец:

      Приготовьте тонкий мазок, используя примерно 10 мкл свежих или консервированных образцов на предметном стекле. Образцы могут включать стул, мочу, культуру или другие типы образцов. Зафиксировать на предметном стекле при температуре 60°C до полного высыхания (5-10 минут).

      Реагенты

      Эта процедура состоит из двух этапов, требующих следующих растворов:

      1. Абсолютный метанол
      2. 0,01 % реагент Calcofluor white: приготовьте 0,01 % раствор в 0,1 М трис-буферном солевом растворе, pH 7,2

      Процедура

      1. Приготовьте тонкий мазок фекального, культурального или другого образца материала.
    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *